苦皮藤内生真菌As菌株农药活性成分初步研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:panlihuang
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本论文以一株编号为As的苦皮藤内生真菌为出发菌株,研究了其代谢产物对12种作物病原真菌的离体活性以及盆栽防治小麦白粉病的效果;应用形态学的方法鉴定了其种属地位;从菌丝体提取物中分离得到三个化合物,测定了其对几种作物病原真菌的抑菌活性,并对化合物Z02的结构进行了初步研究;采用正交试验法对As菌株的发酵条件进行了优化。通过对试验结果的分析和讨论,取得了以下结论:1生物测定结果表明,As菌株发酵产物中菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种植物病原真菌具有明显的抑菌活性,其中甲醇提取物的抑菌活性较乙酸乙酯强。甲醇提取物在4000μg·mL-1浓度下对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率均大于80%;在浓度为5000μg·mL-1时对玉米弯孢叶斑病菌、马铃薯干腐病菌和烟草赤星病菌孢子萌发的抑制率均超过80%。盆栽试验结果表明,As菌株发酵菌丝体的甲醇提取物在4000μg·mL-1浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在65%以上。2根据As菌株气生菌丝、大型分生孢子、小型分生孢子及菌落性状,对比相关分类系统,将As菌株初步鉴定为半知菌亚门尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。3采用硅胶柱层析、反相HPLC制备等方法,在生物活性追踪指引下,从As菌株代谢产物菌丝体甲醇提取物中分离出3个化合物Z01、Z02、Z03。采用UV,1H NMR,13C NMR,MS等技术对化合物Z02的结构进行了研究,但其结构尚无法确定;化合物Z01、Z03由于没有合适的溶剂,因此相关的波谱测试无法进行。3个化合物的生测结果表明,在200μg·mL-1浓度下,Z01没有明显的抑制孢子萌发活性,而Z02、Z03有明显的抑制孢子萌发活性,其中Z02抑菌活性最强,抑制玉米弯孢叶斑病菌孢子萌发的EC50仅为86.63μg·mL-1。4通过单因子试验和多因子正交试验对As菌株的培养基配方和发酵条件进行了优化。最佳培养基配方为:葡萄糖2%、土豆20%、蛋白胨0.5%、0.1%K2HPO4和0.1% MgSO4。最佳发酵条件为:初始pH值为6.0~7.0,种龄96h,接种量5块菌饼(每100 mL发酵液),培养温度26℃,发酵时间168h,装液量100mL(每250 mL三角瓶),转速180rpm。
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