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在植物中,双链RNA结合蛋白HYL1、DCL1和SE等蛋白形成RISC复合体,参与并影响许多小分子RNA的生物合成,从而调控这些micro RNAs靶基因的表达,对植物的生长发育起到至关重要的调控作用。研究发现,拟南芥hyl1突变体对IAA不敏感并且抑制生长素的运输。本文将苹果MdDRB1基因在番茄中异位表达,鉴定MdDRB1在番茄中对生长素的响应,以探讨MdDRB1功能的保守性。很多研究表明miR156和miR172涉及到了植物的开花,它们既可以单独起作用也可以一起调节开花时间。另外,我们的前期研究表明,将反义MdDRB1转苹果基因愈伤组织中,很多micro RNAs受到不同程度的上调或下调,其中miR156的积累水平明显降低,而miR172的积累水平明显升高。于是,本研究将苹果Md-MIR156h和Md-MIR172e基因分别在苹果中过量表达,并获得了过表达Md-MIR156h和Md-MIR172e基因的转基因苹果植株,为进一步揭示MdDRB1作用的分子机制以及Md-MIR156h和Md-MIR172e基因的生物学功能,特别是为与开花有关的分子机制的研究奠定了基础。主要研究结果如下:1、MdDRB1基因在番茄中过量表达构建正义表达载体pCAMBIA1391-Md DRB1并遗传转化番茄,MdDRB1基因的PCR以及半定量RT-PCR结果表明已获得转基因番茄植株,MdDRB1基因在番茄中成功异位表达。2、生长素相关的小分子RNA及其相应的靶基因的表达选取三个MdDRB1转基因番茄株系,以非转基因野生型为对照,检测生长素相关miRN A的积累情况,与野生型对照相比,转基因株系的miR393表达降低,它的靶基因SlTIR1的表达量升高;miR164的表达量降低,它的靶基因SlNAC1的表达量升高;miR160的表达量降低,它的靶基因SlARF10和SlARF16积累增加;而miR167的表达量是升高的,相似的它的靶基因SlARF8的积累量是降低的。3、MdDRB1基因异位表达影响番茄对生长素的敏感性分别用3μM和5μM的IAA处理长势良好的转基因和野生型对照番茄幼苗,结果发现,相比野生型对照植株,转基因番茄幼苗的侧根数增多,表明过量表达MdDRB1基因确实影响了番茄植株对生长素的响应。4、MdDRB1基因异位表达影响转基因番茄的向光性研究表明,MdDRB1在番茄中过量积累促进转基因番茄的向光性生长。5、Md-MIR156h和Md-MIR172e转基因苹果的获得用过量表达载体p35S:Md-MIR172e和p35S:Md-MIR156h分别转化苹果叶片,对再生植株进行了PCR和半定量RT-PCR鉴定,表明两个基因分别插入了苹果基因组,并提高了转基因苹果植株中相应micro RNA的积累水平。