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鸡蛋过敏已成为食品安全中的重要问题之一。蛋清中含有四种能引起人体发生过敏反应的主要过敏原,包括卵类黏蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶。在食品领域,卵转铁蛋白和溶菌酶因具有重要的功能,常作为功能性成分广泛应用于各种加工食品中。因此,开展卵转铁蛋白和溶菌酶的制备研究具有重要的意义。本研究主要为了构建高效分离卵转铁蛋白和溶菌酶的方法并设计工艺路线,为提供高纯度的卵转铁蛋白和溶菌酶提供技术支撑。研究内容包括①卵转铁蛋白和溶菌酶的分离纯化方法研究;②卵转铁蛋白和溶菌酶的实验室小试放大纯化研究;③卵转铁蛋白和溶菌酶纯化制备的中试工艺设计。整个工作的主要结果和结论如下。1.在实验室分离纯化方法的研究中,建立了 CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析结合Bio-Gel HT Hydroxyapatite羟基磷灰石层析分离纯化卵转铁蛋白的方法,蛋白经SDS-PAGE鉴定其纯度达95%,一个纯化周期可制备0.167g卵转铁蛋白;同时,建立了 CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析结合Sephacryl S-100凝胶层析分离纯化溶菌酶的方法,蛋白经SDS-PAGE鉴定其纯度达97%,一个纯化周期可制备0.125g溶菌酶。2.依据实验室分离纯化蛋白的方法,开展了 8倍线性放大纯化卵转铁蛋白的工艺研究,一次分离得到卵转铁蛋白1.2g,SDS-PAGE鉴定其纯度达97.5%;另外开展了 4倍线性放大纯化溶菌酶的工艺研究,一次分离得到溶菌酶0.6g,SDS-GAGE鉴定其纯度达98%。3.采用圆二色谱及ANS荧光探针鉴定实验室预实验纯化和实验室小试放大纯化所得卵转铁蛋白和溶菌酶的二级结构及表面疏水性。结果发现,二者纯化所得的两种过敏原蛋白的二级结构和表面疏水性没有明显变化,表明在放大纯化过程中它们的空间构象保持相对稳定。4.依据实验室小试放大纯化卵转铁蛋白和溶菌酶的技术参数,设计了一条十克级规模制备两种过敏原蛋白的工艺路线,完成了设备选型并绘制了设备平面流程图。