动物益生芽孢杆菌菌株的筛选及发酵条件优化研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zuoluo1314
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益生菌(probiotics)是一种能够直接饲喂,并且可以通过改善寄主肠道菌群平衡而对动物产生有益作用的活的微生物饲料添加剂。近年来由于抗生素的滥用引起的毒性、药物残留,耐药性,环境污染等问题剧增,给人类的生存和发展造成严重的负面影响。因此寻找安全、无毒的抗生素替代品显得尤为重要。长期的实践和大量研究表明,作为动物微生态制剂的一种,芽孢杆菌不仅能抑制动物肠道内的病原菌,还能够产生多种营养物质,对维持动物机体正常的生理状态和生长繁殖都有重要意义。 本研究根据益生菌筛选的常规方法和芽孢杆菌的判定标准,从健康动物肠道中分离出680株芽孢杆菌进行筛选。经过耐胆酸盐试验结果有75株能够在含0.3%(w/v)的牛胆酸盐培养基中生长,75株芽孢杆菌中有16株能够抑制大肠杆菌,其中有6株能同时抑制肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。对它们再进行耐胆酸盐复筛试验,获得4株芽孢杆菌。经过胃液、肠液、产酶试验得到一株具有优良性状的芽孢杆菌B544。该菌株在pH值为2.0的模拟胃液中2h存活率为21%;4h存活率为5%;在pH值为3.0、pH值为4.0的胃液中能够缓慢生长。在模拟肠液中生长几乎不受抑制。该菌株还具有产淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶的能力。 通过培养特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析对菌株B544进行菌种鉴定,初步确定为枯草芽孢杆菌命名为Bacillus spp.544。 经培养条件和培养基优化试验,初步确定此菌株培养条件为:起始pH值为7.0~7.3,装液量40mL/300mL,种子液培养15h,接种量5%(v/v),控制培养温度37~40℃。最佳培养基成分配比为:玉米淀粉1.0%、KH<,2>PO<,4>/K<,2>HPO<,4>0.4%、豆粕粉2.0%、麸皮4.0%活菌数可达3.47×10<10>cfu/mL。
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