目的：利用组织工程技术，研究和开发能修复完全损伤脊髓的组织工程材料，为脊髓损伤的治疗提供新思路、新方法。 方法：1．神经干细胞的分离培养及鉴定 取SD大鼠胚胎（孕14-16d）大脑皮层组织制作单细胞悬液，于DMEM/F12（1:1）、B27、bFGF的无血清培养基中进行细胞培养，并对所形成的神经细胞球进行Nestin免疫荧光染色鉴定；待原代克隆形成后再次机械分离克隆，制作单细胞悬液传代继续培养扩增，再采用有限稀释法进行单细胞克隆试验，并进行细胞传代能力、细胞分化能力的检测。2．壳聚糖与神经干细胞生物相容性的研究 在第一步研究的基础上将培养、扩增到一定数量的单克隆神经干细胞移植接种至壳聚糖膜上进行复合培养1周，在倒置显微镜下观察神经干细胞生长增殖情况及形态变化，并对其分别进行免疫组化染色、电镜观察，以了解壳聚糖对神经干细胞生长、增殖、分化的影响。3．组织工程材料修复脊髓损伤 运用成年健康SD大鼠制成脊髓缺损模型（T₈部位5mm完全缺损），将神经干细胞与壳聚糖复合物植入其脊髓缺损处，观察神经干细胞生长、分裂、增殖、分化、迁移情况以及其对脊髓内神经胶质细胞、神经轴突再生的影响和作用，并进行大鼠行为学观察、诱发电位检查、以及神经示踪和免疫组织化学检测等形态学观察。 神经干细胞修复脊髓损伤的组织工程学研究 中文摘要 结果：1．所获得细胞的特异性抗原 Nestin染色呈阳性，体外培养条件下具 有较强的分裂增殖能力和自我更新能力，并具有多分化潜能，这些 生物学特性表明所获得的细胞是神经干细胞。2．在联合培养条件 下，神经干细胞仍能维持其原有特性；在含血清的培养基中，神 经干细胞能分化成多种形态的神经细胞，并且在壳聚糖上生长良 好，说明壳聚糖与神经干细胞具有较好的生物相容性。3．神经干细 胞与壳聚糖构成的组织工程材料植入SD大鼠脊髓完全缺损模型 后，壳聚糖内的神经干细胞能存活、迁移并分化成多种形态的神经 组织细胞，并诱导神经轴突向组织工程材料内生长；形态学检查显 示植入的组织工程材料能桥接缺损两端脊髓；诱发电位检测显示大 鼠脊髓在术后2月恢复了电生理上的连续性。 结论：1．从胚鼠大脑皮层可以培养出神经干细胞。2．壳聚糖与神经干细胞 有良好的生物相容性。3．神经干细胞与壳聚糖制成的组织工程材料 可以桥接脊髓缺损，为完全性脊髓损伤的治疗提供了一个新的可能 的技术路线。