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慢性粒细胞白血病(CML)是一种发生在多能造血干细胞上的恶性骨髓增生性疾病,可以检测到特征性BCR-ABL融合基因,病程由慢性期逐渐进展至急变期,预后差,目前常规治疗仍然无法彻底治愈,白血病干细胞的存在及其白血病细胞的耐药性是重要原因；目前认为调节细胞生长和分化的wnt信号通路在多种恶性血液病及肿瘤干细胞中异常激活,与CML疾病进展、耐药有密切关系。对wnt信号通路与CML的关系进行研究,具有重要的理论和实际意义。目的：检测CML不同病变细胞及不同疾病状态下wnt信号及相关分子的表达,研究K562、分选CD34阳性细胞及CML慢性期和急变期患者wnt-1、wnt inhibitory factor-1］β-catenin、cyclinD1基因表达水平,分析wnt信号及相关因子的表达水平在慢性期和急变期患者及CD34阳性细胞间是否存在差异,了解wnt信号通路与疾病进展及耐药的关系,探索干预CML治疗的新靶点。方法：K562细胞培养,免疫磁珠分选CD34阳性细胞,流式细胞仪检测K562和分选阳性细胞CD34抗原表达及细胞周期；甲基纤维素克隆培养K562及CD34阳性细胞,比较两者的集落形成能力；实时荧光定量RT-PCR检测K562及分选阳性细胞中wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、cyclinD1及ABCG2基因表达情况。收集CML慢性期、急变期及良性血液病患者骨髓标本,提取RNA,通过实时荧光定量RT-PCR的方法比较疾病不同时期之间以及和良性血液病之间wnt-1、wnt inhibitory factor1、β-catenin、cyclinD1mRNA转录水平的变化。统计分析软件SPSS17.0分析CML慢性期、急变期和良性血液病患者wnt-1、wnt inhibitory factor1、β-catenin、cyclinD1基因表达水平,三组间比较采用非参数Mann-Whitney-U秩和检验,目的基因之间相关性分析采用spearman的秩相关分析。结果：流式细胞仪分析显示,K562细胞株中表达CD34抗原的细胞的比例为0.8%,G0/G1期细胞比例为33.7%,S期细胞比例为44.2%,G2/M期细胞比例为22.1%；分选阳性细胞中表达CD34抗原的细胞比例为79.2%,G0/G1期细胞比例为55.5%,S期细胞比例为9.4%,G2/M期细胞比例为35%；经过甲基纤维素克隆培养,K562的细胞集落形成数为13.67±10.97,分选阳性细胞的集落形成数为79.50±18.96；K562中wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、cyclinD1及ABCG2表达水平分别为49.30×10-2±12.10×10-2、0.087×10-2±0.013×10-2、150.84±9.48、20.08±0.61、0.22×10-2±0.049×10-2,分选阳性细胞中wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、cyclinD1及ABCG2表达水平分别为332.11×10-2±51.71×10-2、0.027×10-2±0.010×10-2、187.21±16.22、25.64±2.54、2.6×10-2±1.1×10-2。急变期wnt-1、wnt inhibitory factor-2、β-catenin、 cyclinD1表达水平分别为30.55×10-2、0.06×10-2、153.05、18.19,慢性期wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、cyclinD1表达水平分别为3.02×10-2、1.81×10-2、36.53、1.21,良性血液病患者wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、cyclinDl表达水平分别为0.33×10-2、19.67×10-2、21.68、0.19,三组间目的基因比较采用非参数Mann-Whitney-U秩和检验,三组间wnt-1、wnt inhibitory factor-1、β-catenin、 cyclinD1表达水平有差异,P<0.05,差异有统计学意义。分选阳性细胞的集落形成能力和ABCG2表达水平均高于K562,分选CD34阳性细胞中wnt-1、β-catenin、cyclinDl表达水平高于急变期患者,急变期患者高于慢性期患者,慢性期患者高于良性血液病患者,wnt inhibitory factor-1表达水平分选CD34阳性细胞低于急变期患者,急变期患者低于慢性期患者,慢性期患者低于良性血液病患者。相关性分析采用非参数spearman的秩相关,分析可知,在慢性期、急变期、良性血液病患者中,wnt-1和β-catenin表达水平呈显著正相关(r=0.993、p<0.05,r=1,r=0.991、p<0.05),其中急变期患者两者呈完全正相关,wnt-1和cyclinD1表达水平呈完全正相关(r=1,r=1,r=1),β-catenin和cyclinD1表达水平呈显著正相关(r=0.993、p<0.05,r=1,r=0.991、p<0.05),其中急变期患者两者呈完全正相关；wnt inhibitory factor1和wnt-1表达水平呈显著负相关(r=-0.9、p<0.05, r=-0.988、p<0.05, r=-0.991、p<0.05), wnt inhibitory factorl和β-catenin表达水平间呈显著负相关(r=-0.986、p<0.05,r=-0.988、p<0.05,r=-0.982、p<0.05), wnt inhibitory factorl和cyclinD1表达水平间呈显著负相关(r=-0.993、p<0.05,r=-0.988、p<0.05,r=-0.991、p<0.05)。结论：CML作为一种恶性的血液肿瘤性疾病,造血细胞增殖和分化紊乱,含有少量CD34阳性的白血病样干细胞,wnt信号通路在CML急变期、CD34阳性细胞中有明显异常的激活,提示疾病进展与wnnt信号通路的过度激活可能存在相关性,CD34阳性细胞的wnt信号通路活性异常高于急变期和慢性期的病变细胞,一定程度上可解释CML进展和难治的原因。wnt信号通路的过度激活可能是CML疾病进展及耐药的重要因素之一。