【摘 要】
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目的:通过研究8-氯腺苷对乳腺癌细胞增殖迁移侵袭的影响及其对乳腺癌中ADAR1的启动子转录调控机制以了解8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用方式,寻找8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用机制和对应靶向治疗的新的靶点,同时为8-Cl-Ado治疗乳腺癌奠定可靠的科学基础,和靶向基因治疗的新的科学依据和研究基础。方法:10μmol/L的8-氯腺苷作用于不同的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231不同时
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目的:通过研究8-氯腺苷对乳腺癌细胞增殖迁移侵袭的影响及其对乳腺癌中ADAR1的启动子转录调控机制以了解8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用方式,寻找8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用机制和对应靶向治疗的新的靶点,同时为8-Cl-Ado治疗乳腺癌奠定可靠的科学基础,和靶向基因治疗的新的科学依据和研究基础。方法:10μmol/L的8-氯腺苷作用于不同的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231不同时间,然后通过CCK-8,平板克隆检测细胞的增殖情况,细胞的迁移和侵袭情况通过Transwell技术来检测,其周期和凋亡使用流式细胞术进行检测;ADAR1过表达后采用CCK-8检测细胞的增殖情况,Transwell检测细胞的迁移和侵袭情况;10μmol/L的8-Cl-Ado作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7不同时间后,RT-PCR检测ADAR1 m RNA表达水平,Western blotting检测ADAR1蛋白表达水平变化;构建ADAR1启动子的PE-GFP-N1荧光载体以及对应的双荧光素酶报告载体,10μmol/L的8-Cl-Ado处理48h后Western blotting检测对应的GFP蛋白表达水平变化,倒置显微镜拍摄细胞荧光强度变化,找到相关作用转录因子片段,生物信息学分析确定转录因子;双荧光素酶报告实验、染色质免疫共沉淀验证转录活性;转录因子敲低后检测细胞的迁移和侵袭情况。结果:1.10μmol/L的8-Cl-Ado对乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力存在抑制作用;2.在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中,ADAR1过表达会增强其增殖、迁移和侵袭能力;3.乳腺癌细胞中ADAR1蛋白和m RNA的表达水平随着8-Cl-Ado处理时间的增加而逐渐降低;4.8-Cl-Ado处理ADAR1启动子不同片段荧光载体后,荧光强度发生改变,可以找出含有相关调控转录因子的启动子片段;5.双荧光素酶报告实验验证确定转录因子为PU.1;6.染色质免疫共沉淀验证转录因子PU.1;7.PU.1敲低影响乳腺癌细胞的增殖迁移侵袭;结论:1.8-Cl-Ado能抑制乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭,且在48 h及72 h效果较好;2.ADAR1能够调控乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭;3.8-Cl-Ado能通过影响ADAR1在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中的表达变化来影响其增殖、迁移和侵袭;4.8-Cl-Ado通过影响ADAR1启动子上的转录因子下调ADAR1进而调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的侵袭、迁移和增殖;5.PU.1调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力;6.8-Cl-Ado通过PU.1调控ADAR1进而调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力。
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