第一部分长链非编码RNA CRNDE-h在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理和预后的关系目的：通过对lncRNA CRNDE-h在结直肠癌(CRC)中的表达水平、生物效应以及临床意义进行研究,探讨CRNDE-h在CRC发生、发展中的作用及临床意义。方法：采用实时定量PCR方法检测142对CRC组织及癌旁正常组织,69例增生性息肉,21例炎症性肠病和73例腺瘤组织中lncRNA CRNDE-h和IRX5 mRNA的表达水平。结果：CRC组织中的lncRNA CRNDE-h的表达量显著高于良性疾病各组和癌旁正常组织组(P均<0.01)。腺瘤组lncRNA CRNDE-h的表达量显著高于炎症性肠病组、增生性息肉组和癌旁正常组织组。(P均<0.01)。lncRNA CRNDE-h的表达量与肿瘤大小、淋巴结转移及远处转移显著相关。lncRNA CRNDE-h诊断CRC的ROC曲线下面积(AUC)为0.757,最佳cut-off值为1.256,诊断敏感性为70.4%,特异性为70.8%。Kaplan-Meier曲线分析证明了高水平的lncRNA CRNDE-h与较低的整体生存期(OS)显著相关(P＜0.001)。Cox风险比例回归模型分析显示高表达的CRNDE-h是CRC整体生存期的独立危险因素。为进一步探讨lncRNA CRNDE-h在CRC发生发展中的作用,本实验经过Spearman rank线性回归分析发现了在结直肠癌组织中lncRNA CRNDE-hde表达量与邻近基因转录的mRNA IRX5的表达量显著相关(r=0.692,P<0.001)。结论：LncRNA CRNDE-h表达水平在CRC组织中显著升高,并且与患者肿瘤恶性程度和不良预后有关。lncRNA CRNDE-h可以作为CRC预后的一项潜在的肿瘤标志物。第二部分：血清exosome lncRNA CRNDE-h的检测及其对结直肠癌诊断及预后价值的评价目的：评估血清exosome lncRNA CRNDE-h对结直肠癌(CRC)的诊断及预后价值。方法：本课题按照研究目的分为四部分。1、采集血清标本论证exosome及exosomal CRNDE-h的最佳提取方法。2、采集5例不同结直肠癌患者的血清标本,每份标本分为2份,分别进行exosome的提取和总RNA的直接提取。将所提取的exosome和纯RNA样本分别进行反复冻融、-80℃储存、室温放置、强酸强碱处理和RNase处理,论证exosome对lncRNA的保护作用及其稳定性。3、体外试验和体内试验分别论证血清中exosomal CRNDE-h的来源。(1)选取6种不同的结直肠细胞系,包括5种不同结直肠癌细胞系(HCT116, SW480, SW620, HT-29和LoVo)和1种正常结直肠粘膜细胞系(CCC-HIE-2),分别使用RT-qPCR检测培养1天、2天和3天的细胞培养上清中exosomal CRNDE-h的表达量；(2)取50例结直肠癌组织标本检测lncRNA CRNDE-h的表达量,采集与结直肠癌组织配对的术前血清标本,检测exosomal CRNDE-h的表达量,并通过Spearman rank分析验证两组数据的相关关系；(3)使用LoVo细胞系移植瘤动物模型,成瘤后取小鼠血清,检测荷瘤组与空白组exosomal CRNDE-h的表达量并进行对比；(4)采集20对结直肠癌根治术术前和术后14天的血清标本,检测exosomal CRNDE-h的表达量并进行对比。4、采集468例结直肠癌病人血清标本,包括148例结直肠癌患者血清、80例腺瘤患者血清、80例增生性息肉患者血清、80例炎症性肠病患者血清和80例健康对照血清,论证exosomal CRNDE-h与CRC临床病理参数的关系及CRC的诊断和预后价值。结果：1、低分辨透射电镜观察exosome形态,为直径40-100nm的茶托状有被小泡结构,并且exosome表面特征性表达CD63分子和Hsp70分子。2、总RNA浓度相同的条件下,lncRNA CRNDE-h的表达量在exosome中最高,其次为全血清,而在去除exosome的剩余血清中几乎无lncRNA CRNDE-h存在。3、Exosome样本经常温保存、反复冻融、-80。C冻存、强酸、强碱、RNA酶处理后exosomalCRNDE-h的表达量无明显变化,而提取的纯RNA经过相同条件处理后,其表达量明显降低。4、(1)5种CRC细胞系在培养1天、2天、3天后,培养液中的exosomal CRNDE-h的表达量呈明显升高趋势,而正常肠粘膜细胞系培养液中的exosomal CRNDE-h的表达量无显著差异。(2)在肿瘤移植小鼠模型中可检测到exosomal CRNDE-h的表达,并且其表达量显著高于空白小鼠对照组。(3)CRC根治术后14天的血清exosomal CRNDE-h的表达量与术前血清exosomal CRNDE-h相比显著降低。5. (1) RT-qPCR对468例血清标本进行exosomal CRNDE-h表达量的检测。结果表明CRC患者exosomal CRNDE-h的表达量显著高于良性病患者组和健康对照组(P＜0.01。LncRNA CRNDE-h的表达量与淋巴结转移(P=0.006)及远处转移(P=0.017)显著相关。(2) Exosomal CRNDE-h的cut-off值为0.020,ROC曲线下面积(AUC)为0.892,敏感度为70.3%,特异度为94.4%,其诊断效能显著优于CEA。(3) Kaplan-Meier曲线分析证明了高表达的exosomal CRNDE-h与较低的整体生存期(OS)显著相关(P<0.001)。(4)Cox风险比例回归模型分析显示高表达的exosomal CRNDE-h是CRC整体生存期的独立危险因素。结论：Exosomal CRNDE-h表达水平在CRC患者血清中显著升高,并且与患者恶性临床特征和不良预后有关。Exosomal CRNDE-h可以作为CRC早期诊断、筛查及预后的一项潜在的肿瘤标志物。