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目的:研究报道CSN（COP9 signalosome）信号小体家族中的CSN6在胶质母细胞瘤中过表达与肿瘤进展密切相关,同时有临床数据证明抑制PD-1/PD-L1免疫治疗策略可能为胶质母细胞瘤的治疗提供新的思路。CSN信号小体可能与肿瘤相关蛋白的泛素化调节相关,有研究证实CSN家族成员可以使PD-L1蛋白稳定性增加引起乳腺癌的免疫逃逸。但是CSN6是否通过影响PD-L1蛋白的稳定性,进而调控胶质母细胞瘤中PD-L1表达还不清楚。因此,本研究采用人胶质瘤标本以及体外培养胶质母细胞瘤肿瘤细胞,探讨EGFR-ERK通路是否通过调控CSN6表达,进而介导胶质母细胞瘤中PD-L1蛋白的表达,旨在为胶质母细胞瘤的相关免疫靶向治疗提供新的思路与研究方向。方法:1.收集人胶质瘤标本,采用免疫组织化学法和免疫荧光检测EGFR、CSN6和PD-L1共表达情况;分析其与临床病理学特征和预后的相关性。2.培养人胶质母细胞瘤细胞U87和U251,体外给予EGF激活细胞EGFR-ERK通路,给予ERK阻断剂或siRNA转染技术抑制CSN6表达,在细胞水平验证激活EGFR-ERK通路调控CSN6对PD-L1转录后蛋白表达的影响。结果:1.不同级别人类胶质瘤组织标本中EGFR,CSN6和PD-L1表达与预后相关性TCGA库中人类胶质瘤组织标本中mRNA水平上EGFR在胶质母细胞瘤中表达水平最高（P<0.0001）,与病人不良预后具有相关性（P<0.05）。CSN6在胶质母细胞瘤中表达水平高于星形胶质瘤,星形胶质瘤中的表达水平高于正常脑组织（P<0.0001）,与病人不良预后具有相关性（P<0.05）。PD-L1在胶质母细胞瘤中表达水平高于星形胶质瘤（P<0.05）,与病人不良预后具有相关性（P<0.05）。本研究选取的标本分析结果提示人胶质母细胞瘤组织标本中EGFR蛋白表达高于星形胶质瘤IHC评分[Astrocytoma:1（0,4）vs glioblastoma:4（2,9）]（P<0.0001）,星形胶质瘤病人标本中EGFR蛋白高于正常脑组织,IHC评分[Normal brain:0（0,0）vs astrocytoma:1（0,4）]（P=0.0002）;胶质母细胞瘤与间变星形胶质瘤中EGFR蛋白表达没有统计学差异IHC评分[Anaplastic astrocytoma:6（3,12）vs glioblastoma:4（2,9）]（P=0.1344）。EGFR蛋白高表达与病人不良预后具有正相关性（P<0.0001）。人胶质母细胞瘤组织标本中CSN6蛋白的表达高于星形胶质瘤,IHC评分[Astrocytoma:0（0,2）vs glioblastoma:4（1,6）]（P<0.0001）,星形胶质瘤病人标本中CSN6蛋白与正常脑组织表达没有统计学差异,IHC评分[Normal brain:0（0,1）vs astrocytoma:0（0,2）]（P=0.0969）;CSN6蛋白在胶质母细胞瘤中表达情况高于间变星形胶质瘤,IHC评分[Anaplastic astrocytoma:4（2,8）vs glioblastoma:4（1,6）]（P=0.0388）。CSN6蛋白高表达与病人不良预后具有正相关性（P<0.0001）。人胶质母细胞瘤组织标本中PD-L1蛋白表达高于星形胶质瘤,IHC评分[Astrocytoma:1（0,2）vs glioblastoma:4（1,9）]（P=0.0002）,星形胶质瘤病人标本中PD-L1蛋白高于正常脑组织,IHC评分[Normal brain:0（0,0.25）vs astrocytoma:1（0,2）]（P=0.0036）;胶质母细胞瘤与间变星形胶质瘤中PD-L1蛋白表达没有统计学差异,IHC评分[Anaplastic astrocytoma:4（2,9）vs glioblastoma:4（1,9）]（P=0.2226）。PD-L1蛋白高表达与病人不良预后具有正相关性（P=0.0019）。2.人类胶质瘤组织标本中EGFR,CSN6和PD-L1表达相关性免疫荧光结果显示:EGFR和CSN6;CSN6和PD-L1蛋白在胶质瘤细胞中可以共表达;免疫组织化学结果分析EGFR、CSN6和PD-L1蛋白在胶质瘤组织中表达具有正相关性。3.胶质母细胞瘤PD-L1表达与肿瘤微环境中CD8+T细胞浸润相关性。PD-L1蛋白表达与肿瘤微环境中CD8+T细胞浸润呈负向相关性,其中PD-L1LowCD8+TMore的病人预后最好,PD-L1蛋白表达和CD8+T浸润联合检测,对病人预后判断具有重要意义。4.EGFR-ERK信号通路调控CSN6对胶质母细胞瘤PD-L1表达的影响。体外给予EGF刺激激活EGFR-ERK通路,上调CSN6和PD-L1表达;阻断ERK通路,抑制CSN6和PD-L1表达。通过siRNA技术敲低CSN6蛋白后,EGFR-ERK通路无法上调PD-L1蛋白。半衰期实验发现抑制EGFR-ERK通路促进新蛋白合成后,EGF仍然能够维持PD-L1蛋白的表达水平,进而提示激活CSN6延长PD-L1蛋白半衰期,PD-L1蛋白的稳定性增加。结论:1.人类胶质瘤组织标本中EGFR、CSN6和PD-L1蛋白表达具有正相关性,与病人不良预后密切相关。PD-L1蛋白表达与肿瘤微环境中CD8+T细胞浸润呈负向相关性,其中PD-L1LowCD8+TMore的病人预后最好,PD-L1蛋白表达和CD8+T浸润联合检测,对病人预后判断具有重要意义。2.体外实验中,EGFR-ERK信号通路激活可以上调胶质母细胞瘤中CSN6表达,进而调控PD-L1蛋白表达稳定性。