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非小细胞肺癌(NSCLC)占总肺部恶性肿瘤的80-85%,预后较差,总体5年生存率不到15%,主要与肺癌的转移有关,而肺癌的转移与肺癌血管生成有着密切的联系。近年来研究发现Th17细胞及其分泌的主要因子IL-17不仅在自身免疫性疾病中起到关键作用,还在胃癌、肝癌、乳腺癌,卵巢癌等恶性肿瘤血管生成中起到重要的作用。然而目前关于IL-17对肺癌的生长、转移及肿瘤血管生成作用的研究仍不清楚。本研究首先应用53例非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本,通过免疫组织化学染色检测肿瘤间质IL-17的阳性表达并分析其与肿瘤微血管密度(MVD)的相关性;进而通过建立肺癌原位移植瘤模型进行单独应用IL-17中和抗体及其联合DC101(抗VEGFR抗体)的治疗学研究,通过小动物活体成像监测肿瘤生长及转移情况,分析各组小鼠原位肺癌中MVD值变化,进一步通过ELISA检测了荷瘤小鼠外周血中IL-17和VEGF的表达情况,流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏中TH17和Treg细胞的百分比,旨在探讨IL-17在非小细胞肺癌血管生成中的作用及其相关机制。1 NSCLC中IL-17的表达及与肿瘤血管生成的相关性收集NSCLC手术切除标本53例,通过免疫组化染色发现IL-17阳性表达34例,阴性表达19例(阳性表达率为64%),且发现IL-17阳性表达与患者的性别、淋巴结转移和分化程度无关,与患者的年龄和病理学分型有关(P<0.05),60岁以下患者中IL-17阳性表达率高于60岁以上者(P<0.05),IL-17在鳞癌中的阳性表达率高于腺癌(P<0.05)。IL-17阳性表达组的MVD为63.76±19.94、而阴性表达组为45.63±20.62,NSCLC中IL-17阳性表达组的MVD明显高于阴性表达组(P<0.01),进一步分析了NSCLC组织中IL-17阳性表达与MVD的相关性(r=0.652,P<0.01)。以上结果提示IL-17在NSCLC中的阳性表达与MVD成正相关。的影响2单独应用IL-17中和抗体及其联合DC101对小鼠原位移植瘤生长为了明确IL-17对肺癌生长的影响,初步探讨IL-17促进肺癌血管生成的相关机制,我们构建了肺癌原位移植瘤模型,并通过小动物活体成像检测肿瘤的生长及转移情况,结果显示:与对照组相比,单独应用Anti-IL-17、DC101及联合Anti-IL-17+DC101对小鼠移植瘤的生长均具有不同程度的抑制作用。其中Anti-IL-17与control组比较肿瘤体积明显减小(P<0.01);联合Anti-IL-17+DC101与Anti-IL-17组比较有统计学意义(P<0.05),联合Anti-IL-17+DC101与DC101组比较肿瘤体积有所减小,但无统计学意义(P>0.05)实验结果表明应用Anti-IL-17中和抗体对肺癌移植瘤小鼠治疗后,肿瘤的生长受到抑制(P<0.01)。3单独应用IL-17中和抗体及其联合DC101对小鼠原位移植瘤血管生成的影响应用CD34标记各组肿瘤微环境中新生血管内皮细胞,计数MVD值。结果显示,Anti-IL-17、DC101和Anti-IL-17+DC101组的MVD值分别是34.6±3.36、27.2±4.76和16.6±2.70,与control组(70.4±6.18)比较,各组MVD值均明显下降,具有统计学意义(P<0.01);其中联合Anti-IL-17+DC101与DC101组比较MVD值下降,具有统计学意义(P<0.05)。实验结果表明IL-17中和抗体能够抑制肺癌血管生成。4 IL-17中和抗体对荷瘤小鼠外周血清中IL-17和VEGF因子影响应用ELISA检测荷瘤小鼠外周血中IL-17及VEGF因子的表达,结果显示,Anti-IL-17组IL-17的表达量为525.64±57.76 pg/ml,与对照组(663.39±40.92pg/ml)比较IL-17因子表达降低,具有统计学意义(P<0.05);VEGF的表达量为70.21±4.90pg/ml,与对照组(119.81±3.37 pg/ml)比较具有统计学意义(P<0.05)。与control组相比,单独DC101组IL-17表达量(768.32±53.07pg/ml)却有所升高(P>0.05);而与DC101组比较,联合Anti-IL-17+DC101组的IL-17的表达量(627.11±60.44pg/ml)下降,且VEGF表达量(34.52±3.31pg/ml)明显下降,均有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示IL-17中和抗体可能通过降低VEGF的表达来抑制肺癌血管的生成,进而提高DC101的治疗效果。5 IL-17中和抗体对小鼠脾脏内Th17及Treg细胞的影响应用流式检测了小鼠体内Th17细胞和Treg细胞的百分比:与control组(15.32±1.89)%比较,单用Anti-IL-17用药组小鼠脾脏内Th17细胞百分比(4.41±3.10)明显下降(P<0.01),而单独应用DC101组小鼠脾脏内Th17细胞百分比(21.91±2.09)升高(P<0.05)。与DC101组比较,应用Anti-IL-17+DC101脾脏内Th17细胞百分比(6.10±2.06)有所下降(P<0.01)。与control(10.08±0.85)比较,单独使用Anti-IL-17组(15.69±1.82)或DC101组(13.6±0.85)小鼠脾脏中的Treg细胞均有所升高(P<0.05);与单独DC101组(13.6±0.85)相比,联合Anti-IL-17+DC101组(24.1±1.20)小鼠脾脏内Treg百分比升高(P<0.01)。以上实验提示:肺癌微环境中Th17细胞和Treg细胞所占的百分比可能与IL-17的促血管生成作用有关。通过以上研究我们得出结论:IL-17在非小细胞肺癌组织高表达并且与MVD成正相关;IL-17中和抗体能够抑制荷瘤小鼠肺癌的生长及肺癌血管生成;联合IL-17中和抗体可增强DC101的抗血管生成作用;IL-17在荷瘤小鼠外周血中高表达并且IL-17可能通过促进VEGF的表达来促进肺癌血管生成;IL-17促进血管生成可能与Th17细胞和Treg细胞所占比例有关。