目的：探讨铜绿假单胞菌在慢性化脓性中耳炎中的分布、药物敏感及细菌耐药机理，为慢性化脓性中耳炎的诊疗提供初步临床依据。方法：收集240例慢性化脓性中耳炎患者术前、术中、术后的病灶分泌物，术前、术后标本从外耳道采集，术中标本从鼓窦/鼓室内采集，通过格兰染色和PCR进行铜绿假单胞菌的分离培养与鉴定，并使用纸片法对其进行药敏试验，筛选对喹诺酮类耐药的菌株；并应用PCR结合测序分析铜绿假单胞菌gyrA基因位点突变，探讨该基因的突变与铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药性的关系。结果：（1）240例患者分别在术前、术中、术后采集标本，铜绿假单胞菌培养阳性38例（总检出率15.83%；38/240）；（2）分离培养获得38株中，微量稀释法测得耐氟喹诺酮类抗生素的铜绿假单胞菌有24株，耐药率为63.16%；（3）24株耐药株中gyrA83位密码子未突变菌株有3株占12.5%(3/24);而21株gyrA83位密码子突变，占87.5%(21/24)。结论：(1)慢性化脓性中耳炎患者铜绿假单胞菌检出率为15.83%（38/240），耐药率较高，为63.16%；(2)铜绿假单胞菌染色体DNAgyrA基因第83位密码子突变是其对氟喹诺酮类抗生素的重要耐药机制。