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小类泛素化修饰(SUMOylation)是一种新近发现的细胞内重要的翻译后修饰形式,是通过一系列酶促反应,将一段小的类泛素化修饰肽(smallubiquitin-likemodifier,SUMO)通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的生物学功能。SUMO化修饰是一个可逆的过程,参与SUMO化修饰的酶包括:SUMO激活酶(AOS1/UBA2,E1)、SUMO偶联酶(LJBC9,E2)、SUMO连接酶(E3)和SUMO特异性蛋白酶。
在细胞中,很多因素可以影响蛋白质的SUMO化修饰,如热刺激、过氧化氢、一氧化氮、病毒感染等。过氧化氢是活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)的一种,是影响体内细胞稳态的一个重要因素。本文用0.75mM、7.5mM和75mM过氧化氢分别刺激人胚肾细胞293T、人淋巴浆母细胞瘤单核细胞U937和非洲绿猿猴肾成纤维细胞CV1,应用蛋白免疫印迹(WesternBlot)实验,检测过氧化氢对细胞SUMO化修饰的影响,并比较不同浓度的过氧化氢刺激细胞SUMO化修饰的差异,以及不同细胞系中SUMO化修饰受过氧化氢影响的异同。
免疫印迹结果显示:以0.75mM过氧化氢刺激细胞时,细胞中游离型SUMO与结合型SUMO呈现为先增多后减少；以7.5mM过氧化氢刺激时,细胞中游离型SUMO逐渐增多,被SUMO化修饰的蛋白则逐渐减少；以75mM过氧化氢刺激时,细胞中游离型SUMO急剧减少,被SUMO化修饰的蛋白则逐渐增多。此外本文还检测了不同浓度的过氧化氢刺激细胞后参与SUMO化修饰的AOS1、UBA2及UBC9的表达。本研究为阐明SUMO化修饰的调节机制积累了数据,为研究过氧化氢对真核细胞的影响机理奠定了基础。