肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是世界上排名第五位的恶性肿瘤，在全部的癌症中，它是引起死亡的第三大原因，其死亡率仅次于胃癌、食管癌。之所以我国的肝癌发病率是世界上最高的，因为我国是一个肝炎大国。肝癌现已成为严重威胁人类身体健康的主要疾病之一。肝癌患者初期症状很不明显，晚期主要表现为肝区疼痛、乏力、消瘦、黄疸、腹水等症状。当患者出现典型临床表现的时候绝大部分已属于中晚期，失去手术机会，预后很差。自然生存期绝大多数不超过半年。目前在肝癌众多的治疗方法中，手术仍然是国内和国际上公认的首选的最佳治疗方法，但肝癌术后存在很高的复发倾向，已有研究发现，很多原发性肝癌根治性切除术后的复发率高达70%，复发时间多在术后两年内，肝癌的高复发率使很多肝癌患者丧失了宝贵的生命，如何预测肝癌很高的复发率，以及有效的抑制复发是提高肝癌治疗的关键。肝癌的发病机制繁杂，是多要素、多基因、多阶段协同参与的结果，其中细胞信号传导途径异常对其发生、发展起着举足轻重的作用，在诸多的转导途径中，当前饱受关注的是Wnt/β-catenin转导途径。该通路经过β连环蛋白（β-catenin）在细胞核中积聚而启动靶基因。最新的研究表明β-catenin蛋白在促进肿瘤的发生发展的过程当中起着很重要的作用，Wnt/β-catenin转导途径在正常的细胞中是无激活的。在正常的细胞中，在细胞膜处，β-catenin只作为一种细胞骨架蛋白对维持同类细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用，唯有当Wnt信号分子与细胞膜上的特异性受体蛋白结合后激活胞内的蛋白，使β-catenin避免被磷酸化而不被降解，β-catenin才能在细胞质中积聚起来。当细胞质中的β-catenin浓度到达一定水平时，就能够向细胞核转移，与细胞核中的TCF结合，靶基因c-MYC和cyclin得到转录，两者使细胞周期得到加速，Wnt通路激活。如果没有Wnt信号分子，则β-catenin被降解，不能向细胞核转移，靶基因c-MYC和cyclin不能转录，细胞周期停止，Wnt通路关闭。是否存在有效的药物来抑制肿瘤引发了人们的思考，所以迫切找到一种高效低毒的抗肿瘤药物成为人们的当务之急。羽扇豆醇普遍存在于多瓜果、蔬菜及中草药等植物中，具备较强的抗炎、抗基因突变和抗疟疾功用。最近的研究提示羽扇豆醇具有抗癌作用，加之对人体的的低毒性因此备受关注。前期实验证实羽扇豆醇对肝癌有抑制作用，但其确切机制尚不清楚文献报道可能与Wnt通路阻滞有关。目的：通过羽扇豆醇干预实验，检测Wnt3和β-catenin mRNA和白的变化，探讨羽扇豆醇的作用机制是否与Wnt信号转导通路阻滞有关方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2；分对照组和试验组。常规养对照组细胞，试验组细胞分别施加不同浓度的羽扇豆醇作用不同时间设浓度梯度和时间梯度。用不同浓度的羽扇豆醇（0、15、25、35μmol/L处理HepG2细胞，分别作用于HepG2细胞24h、48h、72h。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，检测细胞Wnt3和β-catenin mRNA达的变化，以β-肌动蛋白作为内参照标准，通过凝胶扫描仪对扩增产进行DNA电泳条带的光密度值分析，将Wnt3与β-肌动蛋白比值作Wnt3mRNA表达水平的参数，对Wnt3产物进行相对定量；将β-连环白与β-肌动蛋白比值作为β-连环蛋白mRNA表达水平的参数Western-Blot方法分别测定各组HepG2细胞中Wnt3、β-catenin蛋白表的变化，同样以β-actin作为内参照标准，对两者蛋白进行相对定量分析所有数据均以x±s表示，采用SPSS13.0统计分析软件进行单因素方差析(ANOVA)和t检验。P<0.05为有显著差异。结果：RT-PCR方法检测Wnt3、β-catenin核酸的表达，结果显示β-catenin mRNA的光密度值比（目标条带/β-actin）在24h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为0.759±0.064、0.620±0.064、0.447±0.050，对照组为0.918±0.050，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，均有统计学差异（P<0.05）。48h各实验分别为0.729±0.062、0.610±0.061、0.448±0.058,对照组为0.907±0.049,各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较均有统计学差异（P<0.05）。72h各实验组分别为0.629±0.063、0.482±0.0640.440±0.057。对照组为0.887±0.058.各实验组与对照组比较差异存在统学意义（P<0.05），实验组两两比较，均有统计学差异（P<0.05）。另外在各实验组中，72h组与24h组比较存在统计学意义（P<0.05）。Wnt3mRNA的光密度值比（目标条带/β-actin）在24h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为0.565±0.009、0.448±0.015、0.417±0.037，对照组为0.849±0.016，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，均有统计学差异（P<0.05）。48h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为0.555±0.015、0.438±0.015、0.417±0.035，对照组为0.839±0.035，对照组为0.839±0.035，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，均有统计学差异（P<0.05）。72h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为0.545±0.009、0.437±0.014、0.414±0.016,对照组为0.820±0.037，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，均有统计学差异（P<0.05）。另外，在25μmol/L和35μmol/L组中，72h组与24h组比较存在统计学差异（P<0.05）。Western blot方法检测Wnt3、β-catenin蛋白的表达，结果显示：β-catenin蛋白的光密度值比（目标条带/β-actin）在24h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.665±0.070、0.877±0.008、0.876±0.030，对照组为1.998±0.156，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，除15μmol/L和25μmol/L之间，其余组之间均有统计学差异（P<0.05）。48h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.627±0.018,0.879±0.081,0.875±0.022,对照组为1.895±0.162，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，除15μmol/L和25μmol/L之间，其余组之间均有统计学差异（P<0.05）。72h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.126±0.015、0.880±0.048、0.879±0.063，对照组为1.494±0.108，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，有统计学差异（P<0.05）。另外，在15μmol/L和35μmol/L组中，72h组与48h组与24h组比较存在统计学差异（P<0.05）。Wnt3蛋白的光密度值比（目标条带/β-actin）在24h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.803±0.097、1.097±0.120、1.038±0.071，对照组为2.162±0.163，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，除15μmol/L和25μmol/L之间，其余组有统计学差异（P<0.05）。48h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.775±0.061、1.141±0.061、1.008±0.181，对照组为2.029±0.071，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，有统计学差异（P<0.05）。72h各实验组按羽扇豆醇浓度从低到高分别为1.351±0.073、0.961±0.101、0.957±0.076,对照组为1.629±0.109，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义（P<0.05），实验组两两比较，有统计学差异（P<0.05）。在各实验组中，72h组、48h组与24h组相比有统计学差异（P<0.05）。结论：1羽扇豆醇能够在核酸水平上抑制肝癌细胞β-catenin与Wnt3的表达。而且这种抑制作用表现出一定范围内的浓度和时间依赖性。2羽扇豆醇能够在蛋白水平上抑制肝癌细胞β-catenin与Wnt3的表达。而且这种抑制作用表现出一定范围内的浓度和时间依赖性。3羽扇豆醇抑制肝癌HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡的机制可能与下调肝癌细胞β-catenin和Wnt3的表达，阻断Wnt信号转导通路有关。