用脂多糖(LPS)诱导人体外周血单核细胞产生hG-CSFmRNA和hG-CSF，诱导第4小时合成hG-CSFmRNA，第12小时培养介质中检测出hG-CSF，第24小时达高峰。用酸性钣-酚-氯仿法提取LPS诱导4小时的人单核细胞总RNA，然后用两个特异性引物通过RNA PCR技术扩增得到所需的G-CSFcDNA。在PCR反应中，使用了不同的退火温度，以选择PCR的最适条件，结果是当退火温度67℃时，扩增的特异性产物最多，非特异性产物最少。将扩增的G-CSFcDNA分别插入到质粒pUC18和分泌型表达载体中并转化受体菌。重组质粒经双酶切后进行琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选，并用斑点杂交和Southern blot方法作了鉴定，最后得到了4个全长cDNA的阳性克隆。插入hG-CSFcDNA的分泌型表达鼠体在大肠杆菌内经IPTO的诱导，表达出rhG-CSF，并分泌到细菌的周质部位。用双单抗夹心ELISA法检测IPTO诱导的重组体细菌的周质蛋白，其酶标反应读效显著高于未经IPTG诱导的重组体细菌和载体对照细菌。这证明我们已经克隆到了hG-CSFcDNA，并且成功地进行了表达。