高单宁酶活力微生物筛选及单宁酶催化没食子酸酯研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq2285387
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以自然界腐烂的五倍子为原料,在以单宁为唯一碳源的培养基中对腐烂五倍子中的微生物进行筛选,并以菌落及水解圈的大小作为初筛原则,从中筛选出20株生产单宁酶的纯种菌株。摇瓶复筛结果表明,菌株T3的产单宁酶活力最高,达到23 U/mL。通过对菌落形态观察和水浸片的观察,初步鉴定目标菌株T3为曲霉。对T3的生长曲线,产酶曲线,没食子酸积累曲线的研究表明,T3菌株在摇瓶培养的第3天,生长己进入稳定期,其产单宁酶的酶活力最高,而此时培养基中的没食子酸含量已经出现了下降,说明T3菌种在生长的过程中,可以以没食子酸做为生长用的碳源。   对菌株进行60Co辐照诱变,研究了辐照剂量与致死率的关系,当辐照剂量在100Gy和300 Gy的时候,致死率较低,为14.51%和25.78%;当辐照剂量上升到500 Gy的时候,此时致死率迅速上升,达到88.99%;当辐照剂量继续上升时,在700 Gy与900 Gy下,致死率都>99%。通过对含溴酚蓝的初筛平板中菌落变色率的研究发现,在从100 Gy到900 Gy的五个辐照剂量下,均出现了比对照平扳变色更早的菌落,因此证明在五个辐照剂量的诱变下,均能产生正突变菌落,其中,500 Gy的变色菌落最多,因此500 Gy辐照剂量下,正突变率最大,为最佳辐照剂量。通过溴酚蓝平板初筛,选择变色最早,菌落直径最大的单菌落进行摇瓶发酵复筛,得到一株编号T3-5-1的曲霉,其产单宁酶活力达到47.69 U/mL,比对照菌株T3的21.47 U/mL提高了222.17%,对其进行传代稳定性研究表明,其传代稳定,未发现菌种退化现象;对其菌落形态和水浸片观察,也未发现其与出发菌株T3产生形态上的差异。   对T3-5-1的最优培养条件进行单因素及正交研究表明,以B-环糊精为碳源、蛋白胨为氮源、培养基初始pH为5.5、单宁酸浓度为3.5%、接种量为5%,摇瓶培养转速120/min,250 mL三角锥瓶中装液50 mL培养基,培养温度为30℃为曲霉T3-5-1的最佳产单宁酶条件。在此条件下,T3-5-1产单宁酶活力达到202.16 U/mL,比优化前提高约4倍。   对T3-5-1发酵所产的单宁酶进行分离纯化,研究发现,传统的硫酸铵沉淀方法并不适用于单宁酶的分离纯化,而直接使用截留分子量12000的透析膜就能达到较好的初步纯化效果,对透析样品进行G-100葡聚糖凝胶层析,得到纯度较高的单宁酶,通过与单宁酶A(sigma)及单宁酶B比较发现,其分子量基本相同。而T3-5-1产单宁酶的比活力最高,达到5304.53 U/mg,单宁酶A为1788.15 U/mg,单宁酶B为935.12U/mgo   对单宁酶在反胶束溶液中的催化反应研究表明,在AOT异辛烷反胶束体系中,单宁酶能催化没食子酸与丙醇的酯化反应,生成没食子酸丙酯。在催化没食子酸与白藜芦醇,二氢杨梅素等含酚羟基类化合物的酯化反应的研究中发现,使用AOT异辛烷反胶束体系,通过换用乙酸乙酯,丙酮,四氢呋喃等不同的助溶剂,发现并没有酯化产物产生。由于酯化反应是一个脱水的反应,因此在添加脱水剂X后,没食子酸与酚羟基化合物的酯化反应得以进行,没食子酸在添加脱水剂X后的AOT异辛烷反胶束体系中,会发生自身聚合反应,生成化合物A与化合物B,其中化合物A通过质谱鉴定其分子量为680,为4个没食子酸的聚合物,而在没食子酸与二氢杨梅素的反应中,也发现有新的化合物C生成。
其他文献
半透明材料的熔化和凝固在工业过程中有重要的应用,例如光学晶体的生长、半透明陶瓷的激光加工等。半透明材料是辐射吸收、发射、散射性介质,内部辐射在一定条件下将显著影响相
随着化石燃料的日益枯竭,开发新能源以替代化石能源刻不容缓。生物质能是世界第四大能源,仅次于煤炭、石油和天然气。生物质能的广泛利用不仅能够缓解能源危机,而且生物质能环保
由于能源危机和环境恶化,太阳能越来越受到人们的重视,但太阳能是低热流密度的能源,为了实现能源利用的经济性必须对太阳能进行聚集。本文研究太阳能聚集材料在受损(粗糙、变
装载机动力总成合理匹配,是充分发挥系统各部件性能的基础,是满足整车动力性和经济性能的保证。因此,动力总成优化的研究对装载机节能减排具有重要意义。目前国内对装载机动力总成优化的研究,多以优化液力变矩器循环圆直径和传动系速比为主,对发动机特性参数的优化较少。因此,通过对装载机载荷谱数据进行采集分析,获取典型作业循环下发动机功率分流情况,对动力总成的优化,整车经济性能的提升具有重要意义。本文针对某企业Z
民族化就是要在各种文化形态中采用民族形式、体现民族特色、民族身份,展现出民族文化的独特性和差异性。由于历史的积淀,各个民族的文化本身就呈现出独特性和差异性,这本是
菠萝茎蛋白酶是从菠萝种植业废弃物--菠萝茎中提取纯化制得,具有很好的水解蛋白活性,可广泛应用于一般工业、食品、医药和洗涤行业,因此具有巨大的经济价值和开发潜力。本文
本文的主体部分是对放置在立式下行φ>42×2.5 mm换热管内置铝制扭带的工作特性进行实验研究和分析,实验分为冷态实验和热态实验两部分,冷态实验主要研究铝制扭带的转动特性和
涡轮气动优化设计的最终过程是多级涡轮全三维气动优化设计,但三维计算在空间和时间上的复杂度都比较高,且设计过程需要考虑的问题非常之多。如果没有一套很好的准三维计算结
在众多的花卉品种中,有一些花卉的形态十分相似,如不仔细分辨,一般人很难区分。现将几种常见而又相似的花卉如何区分,作一些简要介绍。矮牵牛与牵牛矮牵牛和牵牛二者名虽相近
自微型航天器于上个世纪末在NASA诞生至今,国内外对其研究的热度未减。在其执行轨道定位、校正以及姿态调整等任务时,微推进系统往往起到决定性作用。同时,作为微推进系统关键部