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第一部分:TFEB对成骨细胞早期分化功能的影响目的:骨质疏松症是影响老年人生活质量的主要因素之一,成骨细胞功能异常在骨质疏松症的发生发展过程中起着关键性的作用。研究表明自噬对成骨细胞矿化的功能起着至关重要的调节作用,TFEB转录因子是重要的自噬调节因子。因此本研究旨在探究:1、在成骨细胞系MC3T3-E1细胞分化过程中自噬水平以及TFEB的变化;2、转录因子TFEB对成骨细胞分化功能是否有影响,并进一步阐明转录因子TFEB和细胞自噬与骨质疏松症发生发展的关系,为临床预防骨质疏松症和开发新的抗骨质疏松症药物提供一定的理论基础。方法:1、选用成骨细胞系MC3T3-E1细胞,并对其进行成骨诱导,分别检测诱导不同时间点成骨分化标志基因,自噬相关基因和TFEB基因的表达水平。2、采用Western blot检测细胞的自噬标志蛋白LC3的水平,比较成骨诱导不同时间点时自噬标志蛋白表达量的变化。3、采用透射电镜观察自噬体的结构。4、利用LC3双荧光慢病毒自噬流检测系统在激光扫描共聚焦显微镜下观察自噬体的聚集。5、收集成骨诱导的细胞RNA,做自噬相关基因的PCR芯片分析。6、利用si-TFEB慢病毒感染MC3T3-E1细胞,对TFEB敲除的细胞进行成骨诱导分化培养,用Realtime-PCR和Western blot检测细胞内成骨分化标志基因和自噬水平的变化。结果:1、在成骨细胞系MC3T3-E1细胞成骨分化过程中,自噬相关基因和蛋白表达升高,同时,在透射电镜下观察到囊状双层膜的自噬体,激光扫描共聚焦显微镜下观察到标记有GFP/RFP的自噬体的聚集,以及自噬相关基因的PCR芯片聚类图显示多种自噬相关基因的表达上调,这些现象表明细胞内的自噬水平是升高的。2、TFEB敲除的细胞在成骨诱导分化后,其成骨分化标志基因明显低于对照组,细胞内的自噬水平也明显低于对照组。结论:成骨细胞系MC3T3-E1细胞在成骨分化早期自噬被激活,TFEB的表达上调,当TFEB敲除后,细胞的成骨分化能力和自噬水平均下调,这表明TFEB对成骨细胞的早期分化具有一定调节作用,而这种作用有可能是通过自噬途径实现的。第二部分:血尿酸水平与男性2型糖尿病患者骨密度的关系目的:探讨男性2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者的血尿酸(UA)水平与骨密度之间的关系。方法:本研究为回顾性分析,共纳入男性2型糖尿病患者621例,采用双能X线骨密度仪(DXA)检测腰椎(L2-4)、股骨颈(FN)和全髋(TH)的骨密度(BMD),同时检测血清尿酸(UA)水平及血钙(Ca),维生素D3,甲状旁腺激素(PTH),血肌酐(Cr)水平。结果:数据分析显示,在校正多种协变量之后,血尿酸水平与腰椎(L2-4)、股骨颈(FN)和全髋(TH)的骨密度(BMD)之间均存在显著的正相关关系(P<0.05)。血尿酸水平与体重、BMI、血钙、血肌酐和甲状旁腺激素水平之间也存在正相关关系(P<0.05)。按照血尿酸水平三分位进行分组比较,结果发现与最低分位组相比,在最高分位组的患者患有骨质疏松症的风险更小(校正后的OR=0.54,95%的可信区间为0.31-0.95)。结论:研究结果表明在中国男性2型糖尿病患者中,在一定生理范围内的高血尿酸水平对男性2型糖尿病患者的骨密度有保护作用,血尿酸水平越高,骨密度越大。