目的：研究腺病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因／GCV（丙氧鸟苷）自杀基因治疗系统对体外培养的牛晶状体上皮细胞的杀伤效应，并观察该治疗系统所引起的晶状体上皮细胞的凋亡和坏死现象，以验证细胞死亡的机制。 方法：将腺病毒载体在293细胞中扩增，纯化并滴定病毒的滴度。利用携带HSV-tk基因（自杀基因）的重组腺病毒载体ADV／HSV-tk，感染体外培养的牛晶状体上皮细胞，然后用GCV治疗，以MTT比色法和台盼蓝拒染法来测定在不同浓度（0-250ug／ml）的GCV作用下，不同的时间（1-7天）下，HSV-tk／GCV自杀基因治疗系统对晶状体上皮细胞的杀伤效应，并验证HSV-tk／GCV体系的旁观者效应以及观察不同的病毒感染细胞的时间（1-8小时）和不同的病毒复合感染度（MOI）（0.1-1000）对其杀伤效应的影响。实验以切除E₁区的空腺病毒载体ADV／Empty作为对照。然后利用电镜，TUNEL法（脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法）和吖啶橙-溴化乙啶（AO-EB）染色法观察晶状体上皮细胞的凋亡和坏死现象，并测定和比较实验组与对照组晶状体细胞的凋亡和坏死情况。 结果：GCV对感染ADV／HSV-tk的牛晶状体上皮细胞有明显的杀伤作用，且具有旁观者效应，而对转染了ADV／Empty的晶状体细胞则无显著的毒性。在不同浓度GCV（0-250ug／ml）治疗下ADV／HSV-tk组与ADV／Empty组的细胞存活率有明显差异 屈喉衫介导功HS卜tleGCV杜雳地历太以上应耽膻田秩侨(F4．94，P＜0刀 1＊ 而且随 GCV浓度的升高，两组的细胞存活率逐渐下降，在 ADV旧SV－tk组，当 GCV浓度为 25ug／ml时，只有 21．3％－的晶状体细胞仍然存活。HSV－tk／GCV体系对晶状体细胞的杀伤效应随时间的延长而更加显著，ADV／HSV－tk组晶状体细胞的存活率在第1天就降为45．3％，随后逐渐下降，至第7天时，只有8．2％的细胞存活下来，ADV／HSV－tk组与ADV／Empty组随时间的细胞杀伤效应也存在高度差异性(t＝ll．275，P＜0．001人实验证实了 HSV4k／GCV体系的旁观者效应，当转染ADV／HSV工k的晶状体细胞只占总细胞数的10％时，就能引起85．7％的细胞死亡。根据对不同的病毒感染时间下的细胞存活率的比较，发现腺病毒转染晶状体上皮细胞的时间非常短，甚至在1 小时内就可以完成。实验还发现病毒的复合感染度（MOI）对晶状体细胞的存活率有显著的影响，随着复合感染度（MOI）的升高，细胞存活率相应下降。通过电镜观察，TUNEL法和叮淀橙－涅化乙陡（AOEB）染色法检测发现两组中均有部分晶状体细胞出现凋亡现象，同时有大量坏死的晶状体细胞。以AO－EB染色法测定的 ADV／HSV1k组的晶状体细胞凋亡率（t7．28卢0．of）和坏死率（t＝14．716，P＜0．001）明显高于ADV用mPty组。 结论：腺病毒载体可以成功地将HSV《k基因（自杀基因）转导人牛晶状体上皮细胞中，转染ADV／HSV．tk的晶状体细胞可以被GCV有效地杀伤；通过对HSV－tk／GCV引发的晶状体细胞凋亡和坏死现象的观察，验证了细胞死亡的机制可能与凋亡和坏死有关：腺病毒载体介导的HSV－tk／GCV 自杀基因治疗体系有可能成为后发性白内障的有效的治疗方法。