【摘 要】
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端粒酶催化亚单位(TERT)分子是肿瘤细胞发生恶性转化过程中起重要作用的分子,在不同类型的肿瘤组织中广泛表达,而人体正常组织中通常不表达。将TERT作为“通用肿瘤抗原”的肿
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端粒酶催化亚单位(TERT)分子是肿瘤细胞发生恶性转化过程中起重要作用的分子,在不同类型的肿瘤组织中广泛表达,而人体正常组织中通常不表达。将TERT作为“通用肿瘤抗原”的肿瘤免疫治疗策略是很有前景的一种免疫治疗方法。在我们的实验中,我们通过RT-PCR扩增得到了小鼠的TERT分子,将其克隆入穿梭质粒载体shuttle-CMV中得到shuttle-T。再用Pme Ⅰ限制酶将shuttle-T酶切线性化,与超螺旋的骨架质粒AdEasy-2经过电穿孔共转化重组酶阳性(recA+)的宿主大肠杆菌BJ5183。经过抗生素筛选,酶切鉴定获得了同源重组后的腺病毒质粒。将此腺病毒质粒用Pac Ⅰ酶切后,用脂质体(Lipofectamine)包裹转染入整合了腺病毒E4区的人胚肾细胞株293E4。约10天后得到包装的重组腺病毒,命名为AdT。此重组腺病毒经过PCR,western blot及电镜观察均得到证实。为使TERT分子有效靶向进入体内树突状(DC)细胞,我们将所得到的AdT与甘露聚糖偶联,得到糖基化修饰的腺病毒AdT-m,我们以AdT-m作为疫苗来研究它在小鼠体内产生的免疫反应,并由此可能产生的抗肿瘤作用。同时,我们用AdT及不编码外源基因的空病毒Adnull和PBS作为对照。实验发现,经AdT-m免疫的小鼠肿瘤的生长明显减缓且荷瘤小鼠的生存时间延长。进一步的研究显示,AdT-m免疫组小鼠的脾细胞能够杀伤同系的3种肿瘤细胞株及不同系的NK敏感的YAC-1细胞。用抗CD8
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