肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一,是世界排名第三的癌症杀手,在我国则居第二位。HCC侵袭性极强,预后差,因此,早期诊断、早期治疗对肝癌尤其重要。甲胎蛋白(alpha–fetoprotein,AFP)是临床上诊断HCC最常用的肿瘤标志物之一,但敏感性(70%左右)特异性(64%)较低,单独应用AFP诊断HCC容易造成漏诊和误诊。因此,寻找新的HCC标志物是HCC相关研究的一大热点。蛋白质组学能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化,对于探讨疾病发病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说,是一种有效的高通量的研究模式,可获得一些传统手段无法得到的蛋白标志物、关键分子。本研究运用蛋白质组学研究方法及手段,通过对肝癌患者和健康者的血清进行差异蛋白质组学分析,筛选出了一些有潜在应用价值的差异蛋白质,对其中的差异表达补体C3在肝癌细胞SMMC-7721、正常肝细胞HL-7702和肝癌、癌旁组织中的表达水平进行了验证。目的:利用iTRAQ标记技术结合MALDI-TOF/TOF串联质谱对肝癌血清进行差异蛋白组学分析,筛选肝癌潜在血清标志物。方法:通过PubMed查阅2003年1月到2010年8月发表的,采用差异蛋白筛选结合基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱技术(matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-fight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定的有关肝癌生物标志物的文献,同时运用iTRAQ标记技术结合MALDI-TOF-MS串联质谱技术,对20例肝癌患者与20例健康对照的血清进行差异蛋白组学分析。将文献报道的肝癌标志物数据与肝癌血清差异蛋白组学数据进行比对。结果:通过文献检索到符合要求的文献22篇,涉及肝癌相关标志物262个。肝癌血清差异蛋白组筛选出表达有显著差异的蛋白51个,其中在肝癌血清中高表达差异蛋白23个,低表达差异蛋白28个;与文献报道吻合的标志物8个,其中与文献报道表达水平一致的差异蛋白6个。结论:血清中鉴定的6个与文献报道一致的差异蛋白(Ceruloplasmin、Alpha-1-antitrypsin、Apolipoprotein E、Complement C3、Serum amyloid P-component和Apolipoprotein A-Ⅰ)可能是潜在肝癌标志物并值得深入研究。目的:对iTRAQ定量蛋白组学技术鉴定到的差异蛋白补体C3在肝癌细胞SMMC-7721、正常肝细胞HL-7702、肝癌组织和癌旁组织中进行表达差异验证,进一步确证其与肝癌之间的关系。方法:应用RT-PCR技术检测补体C3在细胞和30例组织中mRNA的表达水平,Western blot检测补体C3在细胞中的蛋白表达水平。结果:(1)在蛋白表达水平,肝细胞HL-7702中补体C3的表达量是肝癌细胞SMMC-7721的3.25倍;在mRNA表达水平,肝细胞HL-7702中补体C3的mRNA表达量是肝癌细胞SMMC-7721的4.29倍。(2)癌旁组织中补体C3的mRNA表达量是肝癌组织的22.27倍。结论:C3蛋白和mRNA在肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702中的表达具有显著差异,C3 mRNA在肝癌组织和癌旁组织中的表达具有显著差异,并且表达趋势与iTRAQ结果一致。补体C3作为血清中的一种补体蛋白,可能与肝癌的发生有重要关联,其表达抑制可能对肝癌的产生有促进作用。