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本论文基于铁磁性纳米探针及一系列发光效率高、稳定性强的复合纳米信号标签(RuL@SiO2-AuRuL-Ab2、 RuL-MWNTs@AuRuL-Ab2和PDDA-G@Lu-AuHRP-Ab2),构建了高灵敏度、高选择性、高稳定性及表面可更新的甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)电化学发光免疫传感器。该传感器是由磁性纳米探针、检测抗原及纳米信号抗体,三者在体外(离心管)中通过夹心免疫反应,得到相应的磁性夹心免疫发光复合物,并通过外加磁场将其固定到丝网印刷电极(SPCEs)表面,最后形成磁性可更新的夹心型电化学发光免疫传感器。该磁性可控免疫传感器制备简单,无需对电极进行复杂的修饰,且可重复利用,从而降低了电极使用成本,减少了免疫反应分离及富集的时间,并提高了检测灵敏度,有望用于人血清中痕量肿瘤标志物的快速检测。本论文主要从以下几个方面开展研究工作:1. Fe3O4(核)@Au(壳)(金磁微粒,GMPs)磁性纳米探针的合成及表征首先通过共沉淀法制备了Fe3O4纳米粒子(Fe3O4NPs),并通过种子聚合法直接在Fe3O4NPs表面还原氯金酸(HAuCl4)合成了Fe3O4(核)@Au(壳)纳米粒子(GMPs)。然后用核壳结构的GMPs与甲胎蛋白捕获抗体(anti-AFP,Ab1)经静电吸附并形成了GMPs磁性纳米探针(GMPs-Ab1),最后将其分散于含1%牛血清蛋白(BSA)的pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,并保存于4℃冰箱中备用。对合成的纳米复合物进行表征,结果表明,该方法制备得到的Fe3O4NPs和核壳结构的GMPs,其粒径及形貌都比较均一,制备过程简单、反应条件温和、省时。2.基于Ru(bpy)32+(RuL)掺杂的SiO2-纳米金信号标签及磁珠纳米探针修饰SPCEs所制备的电化学发光免疫传感器利用亲和素化磁珠捕获探针(SMPs/Biotin-Ab1)和双重纳米信号标签(RuL@SiO2-AuRuL-Ab2),构建了一种超灵敏、可更新的甲胎蛋白(AFP)电化学发光免疫传感器。该双重纳米信号标签是在Ru(bpy)32+掺杂的SiO2-纳米金(RuL@SiO2-Au)的基础上负载了Ru(bpy)32+标记的AFP信号抗体(RuL-Ab2),从而形成RuL@SiO2-AuRuL-Ab2双重信号纳米标签。该传感器是有亲和素化磁珠捕获探针(SMPs/Biotin-Ab1)、AFP和RuL@SiO2-AuRuL-Ab2纳米信号标签,经特异性吸附反应,然后通过磁性分离得到SMPs/Biotin-Ab1/AFP/RuL@SiO2-AuRuL-Ab2(SBAR)磁性夹心免疫复合物,最后通过外加磁场固定于SPCEs表面,并对其进行电化学发光表征。传感器得到的发光强度与AFP浓度在0.05–100ngmL-1线性范围内成正比,其检测下限为0.02ngmL-1(S/N=3)。此传感器集分离、富集和检测于一体、可重复利用、制作简单、省时、灵敏度高等优点,有望用于人血清中痕量AFP的快速检测。3.基于RuL修饰的碳纳米管-Au信号标签及GMPs磁性纳米探针修饰SPCEs的电化学发光传感器研制利用GMPs磁性纳米探针和RuL修饰的多壁碳纳米管-Au信号标签(RuL-MWNTs@AuRu-Ab2),构建了一种超灵敏、可更新的电化学发光免疫传感器。该传感器是有GMPs纳米探针(GMPsAb1)、AFP和RuL-MWNTs@AuRu-Ab2,三者经夹心免疫反应,然后通过磁性分离得到GMPsAb1/AFP/RuL-MWNTs@AuRu-Ab2磁性可控的夹心免疫复合物,最后通过外加磁场被固定到SPCEs表面,并对其进行电化学发光表征。其对AFP检测线性浓度范围为0.01–50ngmL-1,检测下限为3pgmL-1(S/N=3)。与上述RuL@SiO2-Au复合物相比,该传感器引入的碳纳米管可大大提高了信号标签的导电性及负载RuL信号分子的能力,从而能显著降低检测下限;采用GMPs固定捕获抗体形成的磁性探针,制备简单,无需复杂的亲和素化,且GMPs表面的纳米金可以很好的保持抗体的活性及提高探针的导电性。4.基于功能化石墨烯信号标签及GMPs磁性纳米探针修饰SPCEs的电化学发光传感器研制通过GMPs磁性纳米探针和功能化石墨烯信号标签(PDDA-G@Lu-AuHRP-Ab2),构建了一种超灵敏、可更新的电化学发光免疫传感器。该信号标签(PDDA-G@Lu-AuHRP-Ab2)是经正电性聚二烯丙基二甲基铵盐酸盐(PDDA)功能化的石墨烯(PDDA-G)和负电性鲁米诺金(Lu-Au)结合,再通过纳米金富集辣根过氧化酶(HRP)和Ab2形成的。该传感器是有GMPs纳米探针(GMPsAb1)、AFP和PDDA-G@Lu-AuHRP-Ab2,三者经夹心免疫反应,然后通过磁性分离得到GMPsAb1/AFP/PDDA-G@Lu-AuHRP-Ab2磁性可控的夹心免疫复合物,最后通过外加磁场被固定到SPCEs表面,并对其进行电化学发光表征。其对AFP检测线性浓度范围为0.002–20ngmL-1,检测下限为0.2pgmL-1(S/N=3)。与上述两传感器相比,该传感器不但通过引入石墨烯提高信号标签的导电性及负载能力,还通过HRP和纳米金,催化鲁米诺和底物H2O2的电化学发光反应,从而实现多重信号扩增,大大的提高了检测灵敏度,显著降低了检测下限。