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研究目的本实验采用盲肠结扎穿孔(CLP)建立脓毒症肺损伤动物模型,分别在CLP术前及术后使用铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)进行干预,通过观察不同时机干预对脓毒症大鼠外周血细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β)表达水平、外周血单核细胞TLR4表达和调节性T细胞(TREG细胞)比例、肺组织TLR4mRNA表达水平以及肺组织病理学评分等变化的影响,探讨PA-MSHA对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用以及可能的发生机制。研究方法健康SD大鼠120只,体重250±25g,分为假手术对照组(SC组,n=30)、脓毒症组(CLP组,n=30)、术前PA-MSHA治疗组(术前给PA-MSHA组,n=30)以及术后PA-MSHA治疗组(术后给PA-MSHA组,n=30)。利用经典盲肠结扎穿孔法(CLP)来建立大鼠脓毒症模型。在大鼠制模后12h、24h、36h各组分别处死10只,对外周血液进行血清细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β的浓度测定;采用实时RT-PCR方法来检测肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达情况;对肺组织进行病理观察和肺病理损伤评分;同时采用流式细胞术检测TLR4在大鼠外周血单核细胞的表达以及调节性T细胞(TREG细胞)在外周血细胞中的比例。研究结果与脓毒症组和术后PA-MSHA组相比,CLP术前给PA-MSHA组肺组织病理学观察损伤程度相对于CLP组和术后PA-MSHA组较轻;术后12h、24h、36h时,术前给PA-MSHA组较CLP组、术后PA-MSHA组病理学评分明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。在术后12h、24h、36h,术前给PA-MSHA组较CLP组和术后给PA-MSHA组外周血IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),IL-10、TGF-β表达水平均明显升高(P<0.01)。术后24h时,与CLP组、术后PA-MSHA组相比,术前给PA-MSHA组外周血单核细胞TLR4表达以及肺组织TLR4 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),且肺组织TLR4 mRNA表达程度与肺组织病理学评分具有相关性(Y=3.27+1.36X,r=0.732,P<0.01),术前给PA-MSHA组TREG细胞在外周血细胞中的比例也出现显著升高(P<0.01),而术后给PA-MSHA组与脓毒症组对比,上述指标均无显著差异(P>0.05)。结论CLP术前给予PA-MSHA治疗可减轻脓毒症大鼠急性肺损伤的程度,其机制可能是PA-MSHA一方面通过介入调节部分免疫细胞,如上调了调节性T细胞(TREG细胞)在外周血细胞中的比例,从而导致IL-10、TGF-β等抗炎因子释放,另一方面通过减少TLR4受体在免疫细胞细胞膜上表达,抑制TLR4-NF-κB-促炎症因子通路,减少促炎因子TNF-α、IL-6等释放,从而有效抑制炎症级联放大反应,减轻了大鼠肺组织损伤。