结直肠癌H2受体的表达及其拮抗剂对SW480细胞增殖和凋亡的影响

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目的:研究H2受体在结直肠癌的表达及意义,及研究H2受体拮抗剂西咪替丁、尼扎替丁对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,诱导其凋亡的作用,探讨H2受体拮抗剂西咪替丁、尼扎替丁抗肿瘤作用机制。方法:采用S-P免疫组化法检测H2受体在结直肠癌的表达及细胞S-P免疫组化法检测H2受体在SW480细胞的表达;采用细胞活力检测、细胞计数、MTT法观察H2受体拮抗剂西咪替丁、尼扎替丁对SW480细胞的生长抑制作用;采用倒置显微镜、光镜观察西咪替丁、尼扎替丁对SW480细胞形态的影响;采用流式细胞术检测西咪替丁、尼扎替丁对SW480细胞凋亡和周期分布的影响。结果:1. 60例结直肠癌H2受体阳性表达率为86.667%;而60例结直肠癌癌旁组织阳性表达率为11.667%;20例非大肠癌患者正常结肠组织H2受体阳性表达率为5.0%。这表明H2受体在结直肠癌组织标本上高表达,其阳性表达率较癌旁组织、正常组织表达要高(P<0.01),差异有显著性。结直肠癌组织H2受体阳性表达率中低分化型较高分化型要高(P<0.05)。2.人结肠癌SW480细胞H2受体阳性表达定位于细胞膜和(或)细胞质内,阳性信号呈棕黄色或黄色颗粒状;这表明H2受体在SW480细胞株上存在阳性表达。3. MTT比色法测定结果显示,2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM西咪替丁对SW480细胞增殖的抑制率分别为11.31%、24.87%、44.93%、64.19%、89.06%;1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM尼扎替丁对SW480细胞增殖的抑制率分别为14.51%、31.36%、47.12%、62.95%、87.89%;不同浓度H2受体拮抗剂西咪替丁、尼扎替丁对SW480细胞作用24小时后具有明显的抑制增殖效应,呈剂量-效应依赖关系。4. SW480细胞对照组细胞群体倍增时间为34.42h;当西咪替丁浓度由0μM增至10μM时,其细胞群体倍增时间由34.42h延长到67.44h(P<0.01);尼扎替丁浓度由0μM增至5μM时,其细胞群体倍增时间由34.42h延长到61.34h(P<0.01)。这表明SW480细胞经H2受体拮抗剂作用24小时后,细胞群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期延长,细胞增殖速度减慢(P<0.01)。5.在光镜和倒置相差显微镜下,与对照组相比,经姬姆萨染色观察,西咪替丁、尼扎替丁处理的SW480细胞,先发生皱缩,体积变小,异形性减少,细胞变圆数目增多,细胞核变小,染色变淡,核仁数量减少,部分可见染色质边集现象;细胞间连接疏松,随后部分变圆细胞浮起。40μM西咪替丁及20μM尼扎替丁连续处理3天后,SW480细胞全部变圆,细胞核碎裂,固缩微核形成,部分不再贴壁。6.流式细胞术分析显示,H2受体拮抗剂西咪替丁对SW480细胞作用24小时后的凋亡率呈剂量-效应依赖关系,并随着西咪替丁药物浓度提高,与空白和溶媒对照组相比,SW480细胞G2/S期细胞减少,G1期细胞增多趋势较为明显(P<0.01),出现细胞周期G1期阻滞,并且促进G1期细胞凋亡。尼扎替丁对SW480细胞作用24小时后的凋亡率呈剂量-效应依赖关系,而且随着尼扎替丁药物浓度提高,SW480细胞S期细胞减少,G1/G2期细胞增多趋势较为明显(P<0.01),出现细胞周期G1/G2期阻滞,并且促进两期细胞凋亡。结论:1. H2受体在结直肠癌组织有表达;结直肠癌组织H2受体在中低分化类型中阳性表达率较高分化类型阳性表达要高。2. H2受体在人结肠癌SW480细胞株上存在阳性表达。3. H2受体拮抗剂西咪替丁、尼扎替丁对SW480细胞具有明显的抑制增殖,促进凋亡效应。
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