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人源醛酮还原酶AKR1C存四种亚型,有研究表明这四种酶与癌症发生发展有关,近年关于AKR1C是否为肿瘤标志物、抑制剂在辅助抗癌及逆转耐受肿瘤的作用等成为生物学、临床医学、药学等行业专家学者研究热点。由于AKR1C四种酶仅在肝组织内同时表达,故本文选取了肝癌细胞HepG2以及对应的正常肝细胞HL-7702作为研究对象,利用Real time-PCR以及Western-blot技术在mRNA和蛋白表达水平上研究了这四种酶在不同细胞中的表达差异;体外重组表达这四种酶,进行了酶学分析;利用AutoDockTools分子对接软件筛选广泛抑制四种酶的小分子抑制剂。研究结果包括以下几个方面:1)mRNA转录水平研究发现,HepG2中AKR1C1的表达量是HL-7702的3.01倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C2的表达量是HL-7702的2.83倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C3的表达量是HL-7702的3.27倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C4的表达量是HL-7702的1.04倍(*P<0.05)。2)蛋白表达水平研究发现,HepG2中AKR1C1的表达量是HL-7702的1.51倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C2的表达量是HL-7702的1.54倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C3的表达量是HL-7702的1.56倍(*P<0.05),HepG2中AKR1C4的表达量是HL-7702的0.49倍(*P<0.05)。3)成功构建四种酶原核表达载体,纯化后四种酶的比活分别是AKR1C1:95659U/mg;AKR1C1:61495U/mg;AKR1C3:66720U/mg;AKR1C4:51045U/mg。4)以DL-甘油醛为底物对四种酶活测定最适条件是pH7.0,37℃,DL-甘油醛浓度5mM,NAPDH浓度0.35mM。5)计算生物学AutoDockTools软件分析,针对10种抑制剂:醋酸甲羟孕酮,熊去氧胆酸,2’-羟基黄酮,茉莉酸甲酯,吲哚美辛,氟芬那酸,甲芬那酸,舒林酸,甲氯灭酸,甲氧萘丙酸的分子结构对接得出结论:醋酸甲羟孕酮是普遍对AKR1C四种酶的有效抑制剂;随后测定了AKR1C四种酶的抑制剂IC50值,符合以上的预测。本实验结果为AKR1C四种酶与肝癌细胞发生发展的深层次机理研究提供实验基础,以及为筛选AKR1C四种酶的小分子抑制剂作为治疗药物提供理论依据和可能的作用机理。