据估计,全球超过4亿人有不同病因造成的伤口,人们发现在使用抗生素治疗伤口期间,容易出现耐药菌,并对组织造成损伤,延长愈合时间。随着湿性愈合理念和湿性敷料的诞生,国内外研究者尝试着将蜂蜜涂抹于创面并取得了良好的愈合效果,目前关于蜂蜜治疗伤口的报告绝大多数都肯定了蜂蜜的效果和应用价值。然而,国内外关于蜂蜜促进伤口愈合的机理研究相对缺乏,选取蜂蜜中具体的酚酸化合物来研究其在创伤模型中对皮肤创伤修复的作用也尚未见报道。本研究拟将国内蜂蜜和蜂蜜中含量最高的酚酸成份作为研究对象,通过建立动物创伤模型,观察蜂蜜和酚酸对创面组织的形态学改变及相关生长因子的影响,从细胞和分子水平探讨蜂蜜和酚酸对创伤皮肤的修复作用,有助于加强开展国内蜂蜜和酚酸类物质应用于创伤治疗的基础研究和临床研究,也为临床工作者选择蜂蜜敷料原料来源提供参考,具有非常重要的现实意义。目的：通过建立动物皮肤创伤模型,研究蜂蜜及蜂蜜中的酚酸物质对皮肤创伤的修复作用。方法：180只健康Wistar大鼠随机分为12组,即空白组、无处理组、蜂蜜组、没食子酸(gallic acid,GA) 2倍组、GAI倍组、GAO.5倍组、p-香豆酸(p-coumarin acid, PA) 2倍组、PA1倍组、PAO.5倍组、咖啡酸(caffeic acid,CA)2倍组、CA1倍组和咖啡酸0.5倍组,各组大鼠数量之比依次为4：16：16：16：16：16：16：16：16：16：16：16。通过使用6mm皮肤取样器对除空白组以外的其他各组大鼠造模。造模后,每天按分组给药,于伤后1、3、5、7天,各组分别处死大鼠1只,取创伤处皮肤组织,苏木精-伊红染色判断大鼠皮肤组织愈合过程中炎症浸润、纤维增生及毛细血管增生程度；各组分别共处死4只,采集血液通过酶联免疫吸附技术检测血清中碱性成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor 2, FGF2)和转化生长因子131 (Transfer growth factor β1, TGFβ1)的水平。结果：(1)创面皮肤组织HE染色炎性浸润、纤维增生、毛细血管增生得分情况：1)炎症浸润得分情况：①空白组和无处理组：在正常大鼠(即空白组)中,未见组织形态学改变,各项得分为0。在无处理组,不敷药的情况下,第1天即出现炎性浸润,第3天升高达到峰值,第5、7天较第3天呈持续下降的趋势。提示,创面处于正常愈合过程中,炎性浸润程度先升高后降低。②蜂蜜组：第1天,蜂蜜组高于无处理组并达到峰值,第3天,蜂蜜组高于此时达到峰值的无处理组,第5、7天,蜂蜜组下降,但均低于同时下降的无处理组,且蜂蜜组于第7天下降至与空白组相同的水平。提示蜂蜜组在初期表现出促炎性反应,导致大量炎性侵润,后期表现出抗炎作用,减弱了炎性反应,并缩短侵润时间。③酚酸组：各组于伤后第1天便出现炎性浸润,并且基本上于1、3天达到峰值；于第1天便达到峰值的酚酸组,峰值要低于蜂蜜组的峰值,高于还未达到峰值的无处理组,提示酚酸各组的促炎性作用要弱于蜂蜜组而强于无处理组；于第3天达到峰值的酚酸组要高于正在下降的蜂蜜组,低于达到峰值的无处理组,提示此时的酚酸组已开始表现出抗炎性作用,但效果不如蜂蜜组强；随后第5、7天均出现不同程度的下降,且得分均高于蜂蜜组而低于无处理组,说明了酚酸各组对伤口的抗炎性作用要弱于蜂蜜组而强于无处理组。这一结果说明了酚酸各组的促炎作用和抗炎作用的效果均不如蜂蜜组,但又优于无处理组。④同种酚酸不同倍数组之间：不同剂量的GA组除第1天得分不同外,2倍组大于1倍组,1倍组大于0.5倍组,在均出现不同程度的升高与下降后第3天得分处于同一水平,第5、7天得分均保持下降趋势且分值相同。这一结果只能说明GA2倍组的促炎性作用最好,1倍组居中,0.5倍组最差；但三组的抗炎性作用无差别。不同剂量的PA组和CA组各组均保持相同的分值及变化趋势。综合结果,不同倍数同种酚酸对炎性作用的效果比较中,GA组中2倍组的效果最好,PA和CA各组倍数和效果之间可能没有必然的联系。⑤不同种酚酸相同倍数组组间的比较：无论是2倍组、1倍组还是0.5倍组的不同种酚酸组间进行比较,在第1天,GA组炎性浸润得分都是最高的,提示初期,GA促进炎性反应的作用是最好的；然而各相同倍组数经过第3、5、7天不同程度的升高或者下降后,GA组处于三组酚酸中的最低位置,说明在这三种酚酸中,GA组于中后期抗炎作用是最强烈的。这一结果说明,GA组的效果是最好的,优于PA组和CA组。2)纤维增生和毛细血管增生得分情况：①空白组和无处理组：空白组纤维增生和毛细血管增生得分为0。无处理组第1天均未见纤维增生及毛细血管增生的改变,第3、5、7天持续升高,于第7天出现峰值。提示在自然愈合的过程中,纤维增生和毛细血管增生在7天里自第3天开始持续升高。②蜂蜜组：第1天未出现纤维增生及毛细血管增生的情况,第3、5天持续升高,于第5天出现峰值,提示蜂蜜组峰值较无处理组提前出现,峰值出现后第7天下降,提示蜂蜜组上调纤维增生和毛细血管增生的作用开始减弱,伤口逐渐成熟。综合而言,蜂蜜组的效果要优于无处理组。③酚酸：各组峰值于第5天出现,要低于蜂蜜组的峰值,早于第7天出现峰值的无处理。这一结果提示在对纤维增生和毛细血管增生的作用比较中,酚酸各组作用要优于无处理组而弱于蜂蜜组。④同种酚酸不同倍数组之间：各组第1天均为0。第3天,各组均较第1天升高。GA组中,不同剂量组间,2倍组和1倍组得分相同,高于0.5倍组,各组均在第5天达到峰值,2倍组峰值最高,第7天均下降,2倍组最低,提示2倍组上调纤维增生和毛细血管增生的效果最好,随着伤口的修复,上调作用减弱,2倍组限制纤维增生和毛细血管增生的效果同样也最好。而PA和CA各组的2倍组、1倍组和0.5倍组均保持同步的升降变化,且各时间点得分相同。综合结果,不同倍数同种酚酸对纤维增生和毛细血管增生的效果比较中,GA组中2倍组的效果最好,PA和CA各组倍数和效果可能没有必然的联系。⑤不同种酚酸相同倍数组组间的比较：各组第1天均为0。第3天,无论是2倍组、1倍组还是0.5倍组的不同种酚酸组间进行比较,GA组纤维增生和毛细血管增生得分都是三种酚酸中最高的,说明GA的效果在三种酚酸中是最好的；随时间推移,各酚酸组经过不同程度的升高与下降后,GA组得分处于三种酚酸中最低位置,说明随着伤口的修复,GA组限制纤维增生和毛细血管增生的作用要强于PA和CA。综合结果,GA对纤维增生和毛细血管增生的作用要优于PA和CA。(2)血清FGF2的结果1)空白组和无处理组：各时间点无处理组均高于空白组,各组间p<0.05,差异具有统计学意义,提示组织损伤后,血清中FGF2水平有所增加。无处理组各时间点FGF2含量虽升高,但两两相比无差异(p>0.05),说明创伤在自然愈合过程中,组织分泌FGF2的作用变化平缓,导致各时间点变化不大。2)蜂蜜组：第1、3天均高于无处理组(各组间p<0.05,差异具有统计学意义)；第3天达到峰值后,第5、7天不断下降,并于第7天和空白组FGF2水平相当(p>0.05)。提示蜂蜜对组织FGF2的分泌具有调节作用,在促进创伤愈合的早期,可以加速上调FGF2的分泌,中后期上调FGF2的分泌作用减弱,于第7天已到达愈合完成的结局。3)酚酸组：第1天,酚酸各组均低于蜂蜜组(各组间p<0.05),且均高于于无处理组(各组间p<0.05),说明相较于自然愈合的无处理组,酚酸可以刺激组织增加FGF2的分泌,但效果没有蜂蜜组好。第3天,酚酸各组均不同程度的升高,但同样均低于蜂蜜组(各组间p<0.05),除去GA2倍组、CA各组分别与无处理组两两相比差异无统计学意义(各组间p>0.05)之外,其余各组均高于无处理组。提示蜂蜜组的效果优于酚酸各组。第5天,酚酸各组上升较少,但均高于于此时下降的蜂蜜组,除GA2倍组与蜂蜜组比较无统计学意义外(p>0.05),其余各组与蜂蜜组组间比较均具有统计学意义(各组间p<0.05)。提示蜂蜜组上调组织FGF2的分泌作用开始减弱,而酚酸组仍在继续上调FGF2的分泌来促进组织愈合,说明酚酸组促进愈合的过程较蜂蜜组缓慢。酚酸各组与处理组比较,除CA2倍组和1倍组分别与无处理组相比无统计学意义(各组间p>0.05)外,其余各组均高于无处理组,且均具有统计学意义(各组间p<0.05)。提示酚酸组增加组织FGF2分泌的效果要比无处理组好。第7天,酚酸各组均与第5天持平,但均高于蜂蜜组(各组间p<0.05),GA组和PA组均低于无处理组(各组间p<0.05)高于空白组(各组间p<0.05),CA组均高于无处理组(各组间p<0.05)和空白组(各组间p<0.05)。提示创伤修复后期,酚酸组虽然上调组织分泌FGF2的作用开始减弱,但上调作用仍然存在,其中GA组和PA组要比CA组的效果好。综合以上结果,提示酚酸组总体的效果不如蜂蜜组,但优于无处理组。4)同种酚酸不同倍数组组间相比：第1天,均是2倍组高于1倍组,1倍组高于0.5倍组,但p>0.05,各组间差异无统计学意义。第3天,各组都达到峰值,同样是2倍组高于1倍组,1倍组高于0.5倍组,但GA组组间相比差异具有统计学意义(各组间p<0.05),PA组组间相比和CA组组间相比,差异无统计学意义(各组间p>0.05)。第5天,酚酸各组较第3天有所下降,第7天较第5天又有所下降,但在这两个时间点中,均是2倍组低于1倍组,1倍组低于0.5倍组,但各组间p>0.05,差异无统计学意义。这一结果提示同种酚酸剂量倍数对FGF2含量的影响之间的差别不大。5)不种酚酸相同倍数组组间相比：无论是2倍组、1倍组还是0.5倍组的不同种酚酸组间进行比较,在第1天,GA组FGF2含量都是最高的,PA组其次,CA组最低,然而经过第3、5、7天不同程度的升高或者下降后,GA组含量处于最低位置,PA组居中,CA组最高。提示创伤初期,GA对上调FGF2表达的作用最强烈迅速,PA其次,CA最差的；创伤后期,GA对减弱上调FGF2表达的作用是最强的,PA其次,CA最差的。综合结果,对FGF2表达的作用,GA效果最好,PA其次,CA最差。(2)TGFβ1结果1)空白组与无处理组：第1天,无处理组高于空白组,p<0.05,差异具有统计学意义,说明组织损伤后,血清中TGFβ1表达有所增加。无处理组各时间点含量不同,均高于空白组,但各时间点两两比较无差异(各组间p>0.05),说明TGFβ1含量虽升高,但各时间点含量差别不大。2)蜂蜜组：第3天较第1天升高并达到峰值,第5天较第3天下降,且1、3、5天均高于空白组(各组间p<0.05)和无处理组(各组间p<0.05),说明蜂蜜可以加速上调TGFβ1表达水平；第7天较第5天下降,低于无处理组(p<0.05),和空白组比较无差异(p>0.05),提示蜂蜜组在此时TGFβ1上调作用减弱,达到正常大鼠血清TGFBI水平。3)酚酸组：第1、3、5天,各组均出现不同程度的变化,但含量均高于无处理组和空白组(各组间p<0.05),均低于蜂蜜组(各组间p<0.05),说明酚酸组可以加速上调组织TGFβ1水平,但上调的力度没有蜂蜜组强。第7天,蜂蜜组此时已达到正常大鼠TGFβ1水平；GA各组有不同程度的下降,但均高于蜂蜜组,尚未回调到正常大鼠TGFβ1水平,且均低于无处理组,但GA2倍组、1倍组和蜂蜜组相比差异无统计学意义,1倍组分别和无处理组组间相比差异无统计学意义；PA各组均不同程度的下降,均高于蜂蜜组(各组间p<0.05),和无处理组比较无差异(各组间p>0.05)；CA各组持平,均高于蜂蜜组(各组间p<0.05)。这一结果说明酚酸组创伤愈合的进程要慢于蜂蜜组。4)同种酚酸不同倍数组组间的比较：第1天,均表现出2倍组高于1倍组,1倍组高于0.5倍组,虽然各组间两两相比差异无统计学意义(各组间p>0.05)。第3天,各组都达到峰值,同样是2倍组高于1倍组,1倍组高于0.5倍组,但只有GA组组间相比以及PA组2倍组和0.5倍组组间相比,各组间差异具有统计学意义(各组间p<0.05),其余同种酚酸各组组间差异无统计学意义(各组间p>0.05)。第5、7天,酚酸各组均有所变化,均是2倍组低于1倍组,1倍组低于0.5倍组,但各组间p>0.05,差异无统计学意义。说明在同种酚酸不同倍数组间,酚酸对上调组织TGFβ1的分泌作用,2倍组强于1倍组,1倍组强于0.5倍组,随着创伤修复的进程,中后期酚酸对上调组织TGFβ1的分泌作用开始减弱,减弱作用2倍组强于1倍组,1倍组强于0.5倍组,但差异无统计学意义。提示同种酚酸不同剂量倍数对组织分泌TGFB1的作用差别不大。5)不同种酚酸相同倍数组组间的比较：无论是2倍组、1倍组还是0.5倍组的不同种酚酸组间进行比较,在第1天,GA组TGFB1含量都是最高的,PA组其次,CA组最低；然而经过第3、5、7天不同程度的升高或者下降后,GA组含量处于最低位置,PA组居中,CA组最高。提示创伤初期,三种酚酸在上调TGFBl的作用比较中,GA作用最强,PA其次,CA最差；创伤后期,三种酚酸减弱上调TGFB1的作用,仍然是GA最强,PA其次,CA最差。故此可以认为在对调节TGFB1的作用中,GA最好,PA其次,CA最差。结论：(1)蜂蜜和没食子酸、p-香豆酸、咖啡酸于创伤初期均能发挥促炎作用、促进纤维增生和毛细血管增生、加速上调血清中FGF2、TGFB1表达的作用；于创伤中后期均能发挥出抗炎作用、限制纤维增生和毛细血管增生、减弱上调血清中FGF2、TGFB1表达的作用。其中蜂蜜的效果要优于三种酚酸。(2)同种酚酸不同倍数之间,对炎性浸润、纤维增生和毛细血管增生的作用效果的比较,GA各组中2倍组最好,PA各组和CA各组倍数与效果之间可能没有必然的联系。(3)不同种酚酸相同倍数组组间各项指标相比,在调节炎性反应、促进纤维增生和毛细血管增生方面的作用,没食子酸的效果是最好的,p-香豆酸和咖啡酸的效果比较有待进一步研究,在调节两种生长因子的作用上,没食子酸最好,p-香豆酸其次,咖啡酸最差。