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KLF5作为一种基础转录因子可以通过介导多条信号通路，在细胞的增殖、分化等方面发挥作用。研究表明KLF5的异常去乙酰化可以干扰细胞的分化，导致增殖失控，进而诱发癌变。KLF5第369位点存在乙酰化修饰，前期研究结果显示该位点突变型KLF5-K369R可以逆转正常KLF5的功能，使KLF5由原本的抑制增殖转变为促进增殖。故本实验旨在探明KLF5行使不同功能的潜在分子机制。 方法：利用 CCK-8增殖检测及细胞周期实验对 KLF5野生型和突变型KLF5-K369R影响增殖的不同表型进行体外功能验证；其次分别以PLHCX和pSin为载体构建两套带有标签的质粒 PLHCX-EGFP-His， PLHCX-KLF5-His和PLHCX-KR-His以及pSin，pSin-FLAG-KLF5和pSin-FLAG-KR过表KLF5和突变型KLF5-K369R，通过病毒包装感染目的细胞DU145和PC-3获得稳转过表达的多克隆细胞系；免疫沉淀实验富集KLF5及其相关作用蛋白，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并进行硝酸银染色，将之与对照组区分出的不同条带切下，质谱检测。 结果：体外增殖验证实验结果表明，KLF5可以抑制前列腺癌细胞系DU1451和 PC-3的增殖，但其突变型 KLF5-K369R可以阻碍这种增殖抑制，甚至表现出了一定程度的促进增殖；PLHCX-EGFP-His，PLHCX-KLF5-His和PLHCX-KR-His以及pSin，pSin-FLAG-KLF5和pSin-FLAG-KR质粒构建完成且在293T细胞中成功瞬时转染过表达KLF5及标签蛋白，但PLHCX-KLF5-His和PLHCX-KR-His在DU145稳定转染细胞中未检测出His标签，故不能用于后续实验；pSin，pSin-FLAG-KLF5和pSin-FLAG-KR已获得了DU145的稳定多克隆细胞系，免疫沉淀实验证明了阳性对照WWP1与KLF5有相互作用，证明KLF5已结合其相关作用蛋白。本实验已完成了 KLF5第369位点蛋白修饰质谱鉴定前期的细胞和样品准备及条件探索，为进一步质谱鉴定具体的蛋白修饰奠定了基础。