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促卵泡素(FSH)是一种对配子的发生、分化、成熟及与生殖有关行为的发生起重要作用的糖蛋白激素。应用基因工程技术得到的重组FSH可避免天然激素制剂在应用过程中的不足,为FSH的高效、广泛地应用带来了契机。一个理想的载体对重组FSH转染至巴斯德毕赤酵母细胞中至关重要。非病毒类载体由于其较高的安全性能、易于大量制备合成、可以传递大片段DNA等优点被广泛运用,但是非病毒类载体目前面临最大的问题是转染效率低下,影响转染效率的因素有很多,其中阳离子脂质体种类和DNA与脂质体电荷比是两大关键因素,调控优化这两个关键因素对设计高转染效率的非病毒类载体意义重大。本实验用限制性内切酶Sal I单酶切质粒pPIC9K / EGFP-FSHβ-CTP-α,利用所得的线性质粒与阳离子表面活性剂构成复配体系,诱使表面活性剂聚集形成“DNA/表面活性剂”囊泡应用于基因传递。通过采用不同阳离子表面活性剂CTAB、DTAB、DEAB和不同DNA/阳离子表面活性剂比例1:0.008、1:0.3、1:1.4、1:4、1:7.2、1:18、1:40分别转染巴斯德毕赤酵母,并与传统的电转化方法和商品化转染试剂Lipofectamine? 2000、Sofast比较,通过对比不同DNA/表面活性剂囊泡,不同电荷比,不同转染方式的目的蛋白FSHβ-CTP-α的表达量来研究重组FSH基因功能表达与转染方式的关系,确定最优化表达的脂质体种类以及阳离子脂质体与重组FSH的最优比例,为巴斯德毕赤酵母表达生物活性山羊重组FSH及商业化应用奠定基础。实验结果显示:1、利用三种不同阳离子表面活性剂CTAB、DTAB、DEAB与线性载体pPIC9K /EGFP-FSHβ-CTP-α构成复配体系,进一步证明DNA可诱导阳离子表面活性剂形成囊泡,可运用于目的基因传递;2、表面活性剂的碳链长度、疏水头基不一样伴随着细胞转染效率的不一致;随着碳链长度的增加,表面活性剂的转染效率随之降低;在相同碳链长度的情况下,亲水头基为甲基的表面活性剂转染效率相对亲水头基为乙基的表面活性剂高;3、DNA/表面活性剂不同电荷也伴随着不同的细胞转染效率;在巴斯德毕赤酵母体系中,CTAB、DTAB、DEAB的最优电荷比均是1:7.2,转染效率最高;过低电荷比1:0.008和过高电荷比1:18、1:40均对细胞转染效率产生不利影响;4、通过调控阳离子表面活性剂体系和DNA/表面活性剂比例,可以实现细胞转染效果优于传统电转化方法和商品化转染试剂Lipofectamine? 2000、Sofast转染效果。本研究通过探讨最优化表达的阳离子表面活性剂种类以及DNA/表面活性剂最优比例,为囊泡法转染DNA的推广奠定了基础,为山羊重组FSH制剂的表达研究和商业化应用奠定基础。