【摘 要】
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从红树林中筛选出一株对富贵竹黑腐病(AspergiIlusnigerV.Tiegh.)有拮抗作用的菌株H5,对该菌株进行了初步鉴定及发酵条件研究,初步探讨了菌株的抑菌机制及发酵液的稳定性,并从
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从红树林中筛选出一株对富贵竹黑腐病(AspergiIlusnigerV.Tiegh.)有拮抗作用的菌株H5,对该菌株进行了初步鉴定及发酵条件研究,初步探讨了菌株的抑菌机制及发酵液的稳定性,并从其发酵液中得到了一种对黑曲霉具拮抗作用的蛋白。
对湛江特呈岛红树林植物红海榄(Rhizophorastylosa)、木榄(B.gymnorrhiza)、白骨壤(Auicenniamarina)等几种红树植物的根、茎、叶样品进行拮抗细菌的分离和筛选,以黑曲霉(AspergillusnigerV.Tiegh.)为靶标微生物,通过对峙培养法从中筛选出有拮抗作用的细菌17株,其中从红海榄(Rhizophorastylosa)根部得到的菌株H5表现较强的平板抑菌能力:对峙平板试验中,抑菌带宽度达10.1mm,管碟法测定试验中抑菌圈平均直径达24mm,生长速率法显示发酵液原液对黑曲霉菌丝生长抑制率达到91.9%。
根据Biolog自动鉴定系统,H5与系统给定的菌株地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)的相似性系数为0.830,距离2.41。通过16SrDNA序列分析对菌株进行鉴定,所测定的序列结果通过多序对比显示菌株H5与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌的相似性均为99%,与Biolog鉴定相结合初步鉴定菌株为地衣芽孢杆菌。
以发酵液的菌量及抑菌活性为指标,研究了碳源、氮源和无机盐对菌株H5生长和抑菌活性的影响并对该菌株的发酵培养基及发酵条件进行优化,通过单因子试验和正交试验获得菌株产抑菌物质的最佳发酵配方及条件为:即牛肉膏8g,蛋白胨4g,乳糖12g,氯化钠3g.起始pH值6.0-7.0,温度28-32℃,装液量20-50ml/250ml,培养时间72~84h,抑菌圈直径最高可达26mm。
抑菌机理的研究结果表明拮抗菌H5对黑曲霉病菌菌丝生长和孢子萌发具有明显的抑制作用,处理后菌丝分枝异常,菌丝原生质浓缩,顶端胞内物质渗漏,菌丝的生长受到抑制,其无菌滤液可以显著降低孢子萌发率,抑制芽管伸长。该菌株不产生几丁质酶,通过分泌抑菌物质起抑菌作用。H5菌株的无菌滤液对热、对酸碱均具有较好的稳定性。
无菌滤液经饱和度60%硫酸铵沉淀后,粗提物具较强的抑菌活性。抗菌物质经121℃处理20min仍能保持约80%抑菌活性,经胰、胃蛋白酶处理后,抑菌活性无明显变化,抗菌活性物质可能主要是一类对热稳定的蛋白质类物质,经SephadexG-100柱层析收集各管并测定各组分抑菌活性,有抑菌活性的组份经SDS-PAGE电泳显示单一条带,从发酵液中得到了一种分子量约为110KD的活性蛋白。
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