KASP标记用于甘蓝指纹图谱构建及杂种优势群初步划分

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结球甘蓝(Brassica oleraceaL.var.capitata)简称甘蓝,是芸薹属的一种重要蔬菜,在我国各地广泛栽培。近年来,市场上的甘蓝品种不断增多,种植面积不断增大。但是,在种子市场上同名异物及同物异名的情况时有发生,甚至一些不合格种子混入市场,造成巨大的经济损失。因此,构建DNA指纹图谱,实现对品种的快速准确鉴定,对于假种辨别和产权纠纷具有重要作用。甘蓝是典型的异花授粉作物,杂种优势十分明显,通过选育自交系配制杂交组合是杂种优势利用的主要途径。而如何进行自交系间的组配,显得至关重要,目前主要依赖于育种家的经验及表型特征或地理来源,因此迫切需要从分子水平上初步划分甘蓝优势群,为育种家利用杂种优势提供科学指导,并提高组合配制效率。  本研究对50份甘蓝自交系进行重测序,开发SNP标记。挑选一部分SNP标记转化为KASP标记,对主要甘蓝品种及自交系进行基因分型检测,根据分型数据构建主要甘蓝品种的DNA指纹图谱并划分甘蓝自交系的杂种优势群。主要研究结果如下:  1.甘蓝全基因组KASP标记开发  采用Illumina Hi-Seq2500平台对50个甘蓝高代自交系进行全基因组重测序,将重测序数据与参考基因组02-12进行比对,共筛选获得2.54×106个SNPs。在全部SNP中筛选多态性介于40%~60%、未测通材料数<20、在9条染色体均匀分布、位点前后各50bp不存在其他变异,最终获得500个SNP位点。并将其转化为KASP标记,其中442个成功转化,转化成功率88.4%。在每条染色体中随机挑选1个标记,利用KASP平台对96个甘蓝自交系材料进行基因分型,9个标记全部分型成功。结果表明,开发的KASP标记的分型效果较好,可用于下一步试验。  2.基于KASP标记构建甘蓝主要品种的DNA指纹图谱  利用甘蓝全基因组开发的KASP标记,对59个主要甘蓝品种进行分型。在442个标记中,有25个标记的未分型材料数>5,为保证结果准确性,在后续分析中将这25个标记去除。根据基因分型结果,筛选多态性信息含量>0.35、无基因型数据缺失、在9条染色体上均匀分布的50个SNP位点作为核心标记,构建甘蓝品种指纹图谱。通过人工构建模拟群体进行验证,结果表明利用50个核心SNP标记构建的DNA指纹图谱可实现对甘蓝品种真实性和特异性的有效鉴定。  3.利用KASP标记进行甘蓝自交系杂种优势群初步划分  根据栽培茬口的不同,可将246个甘蓝自交系分为春甘蓝、秋甘蓝、越冬甘蓝三种类型。其中,春甘蓝包含77份材料,秋甘蓝包含72份材料,越冬甘蓝包含97份材料。基于甘蓝自交系的SNP标记分型结果,对不同栽培茬口的自交系进行遗传相似性分析及聚类分析,并结合系谱关系进行优势群的划分。结果显示,春甘蓝划分为7个优势群、秋甘蓝划分为6个优势群、越冬甘蓝划分为5个优势群。为验证杂种优势群划分的准确性,对上述部分自交系选配的50个优良杂交组合的双亲进行分析,除越冬甘蓝中‘嘉丽-绿×嘉丽-灰’组合为亚群内杂交外,剩余组合均为群间或亚群间杂交,这说明杂种优势群的划分较为合理。由此我们认为尽量选择群间或亚群间亲本材料进行组配,这将为杂交组合的科学配制提供依据,提高甘蓝杂种优势利用效率。
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