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目的探讨体外培养原发性开角型青光眼小梁细胞的方法及其生物学特性,在此基础上研究透明质酸(hyaluronic acid or hyaluronate HA)以及HA-CD44信号通路对体外培养小梁细胞表达基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2.9)的影响。方法采用原发性开角型青光眼患者小梁切除术中取得带小梁网的巩膜组织块进行体外培养。运用透射电镜,免疫细胞化学等方法对细胞进行鉴定,观察其生物学特性,并与正常小梁细胞进行比较。采用RT-PCR和酶谱法检测体外培养的传3代小梁细胞经浓度为0mg∕ml(对照组),1 mg∕ml,3 mg∕ml,6 mg∕ml的HA处理24小时的体外培养的开角型小梁细胞表达MMP-2,MMP-9的量;运用CD44抗体,MEK1的抑制剂PD98059抑制HA-CD44信号通路的活化,观察MMP-2,MMP-9表达量的变化。结果1.组织块培养10天左右,可见细胞从其边缘向外生长。经鉴定为原发性开角型青光眼小梁细胞,与正常小梁细胞相比,其纤维连接蛋白、层粘连蛋白表达水平相对较高。但其细胞表面的微绒毛,胞浆的溶酶体、吞噬小泡含量相对减少。2应用RT-PCR法检测经浓度为1 mg∕ml,3 mg∕ml,6 mg∕ml的HA处理的实验组细胞MMP-2∕GAPDH吸光度的比值分别1.11±0.03,1.41±0.04,1.87±0.03,各实验组与对照组0.63+0.06相比,P<0.05,均有显著性差异,另经10μg/ml的CD44抗体,50μM的PD98059提前预处理1小时后加入6 mg∕ml的HA实验组细胞MMP-2∕GAPDH吸光度的比值分别0.43±0.05,0.26±0.03。与未预处理的6 mg∕ml的HA实验组相比,P<0.05,均有显著性差异。1 mg∕ml,3 mg∕ml,6 mg∕ml的HA处理的实验组小梁细胞MMP-9∕B-action吸光度的比值分别1.10±0.05,1.35±0.06,2.08±0.04,各实验组与对照组0.67±0.0.05相比, P<0.05均有显著差异,另外经10μg/ml的CD44抗体,50μM的PD98059提前预处理1小时后加入6 mg∕ml的HA实验组细胞MMP-9∕B-action吸光度的比值分别0.51±0.04,0.33±0.03。与未预处理的6 mg∕ml的HA实验组相比,P<0.05均有显著性差异。3.酶谱法检测1 mg∕ml,3 mg∕ml,6 mg∕ml的HA处理实验组细胞MMP-2条带酶解量分别为264.50±5.84,353.39±2.56,447.64±5.451,与对照组176.43±5.77相比,P<0.05均有显著差异,另外经10μg/ml的CD44抗体,50μM的PD98059提前预处理1小时后加入6 mg∕ml的HA实验组细胞MMP-2条带酶解量分别113.29±5.95,61.58±4.09。与未预处理的6 mg∕ml的HA实验组相比,P<0.05均有显著差异。1 mg∕ml,3 mg∕ml,6 mg∕ml的HA处理实验组细胞MMP-9条带酶解量分别为658.51±9.27,895.06±7.15,1146.75±13.04与对照组546.65±5.09相比,P<0.05均有显著差异,另外经10μg/ml的CD44抗体,50μM的PD98059提前预处理1小时后加入6 mg∕ml的HA实验组细胞MMP-9条带酶解量分别282.41±7.44,167.47±4.84。与未预处理的6 mg∕ml的HA实验组相比,P<0.05均有显著差异。结论1.采用组织块法能够成功的体外培养原发性开角型青光眼人眼小梁细胞。2.原发性开角型青光眼小梁细胞表达MMP-2,MMP-9。3.HA能增加体外培养原发性开角型青光眼小梁细胞MMP-2,9的表达,并在一定范围内呈现剂量依赖性。4.CD44中和抗体,ERK1抑制剂PD98059能抑制HA依赖性的体外培养原发性开角型青光眼小梁细胞MMP-2,9的表达。