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目的我们采用了腹主动脉缩窄型高血压大鼠为实验模型,观察大鼠心肌组织中磷脂酶C-β3(phosphalipase C-β3,PLC-β3)在肾素原受体((Pro)renin receptor,(P)RR)所致的心肌损害所致心肌纤维化的作用,检测PLC-β3及其下游的信号转导因子表达、活性及作用机制,为更深入的了解高血压的发病机制提供理论依据。方法选取50只同等重量并且血压较稳定的雄性SD大鼠,采用常规的腹主动脉缩窄术后制备出高血压大鼠动物模型,并且将50只大鼠随机分为五组,每组10只,分组结果如下所示:Ⅰ假手术组(Control,C):未结扎腹主动脉,其它部分同高血压组相同的手术处理,术后常规喂养;Ⅱ高血压组(Aortic ligation,AL):进行腹主动脉缩窄术后,正常喂养;Ⅲ.U73122组(U):腹主动脉缩窄术,术后用PLC-β3抑制剂U73122(40μg/kg/d);Ⅳ.HRP组(H):腹主动脉缩窄术,术后用(P)RR抑制剂HRP(4μg/kg/d);Ⅴ.U73122组和HRP组(U+H):腹主动脉缩窄术,术后U73122和HRP联合治疗;治疗时间为4周。期间测定大鼠尾动脉血压并记录。以上实验完成后进行以下实验检测:RT-PCR检测心肌组织中ACE2、CollagenⅠ、AOG、Renin、MAS、CollagenⅢ的mRNA表达;Western blott检测心肌组织中ACE2、CollagenⅠ、AOG、Renin、MAS、CollagenⅢ的蛋白表达。结果1.大鼠血压测量与对照组(100±3mmHg)相比,高血压组大鼠动脉血压明显升高(P<0.05)。给予U73122、HRP药物及U73122和HRP联合治疗后,与高血压组(155±5mmHg)比较,U73122组(128±5mmHg)、HRP组(131±6mmHg)及U73122+HRP组(126±6mmHg)血压均明显降低(P<0.05),却仍高于假手术组。2.心肌组织AOG、ACE2、MAS、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Renin的mRNA水平检测2.1 AOGmRNA表达水平与对照组相进行比较,高血压组大鼠心脏组织中AOG mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与高血压组相比,运用U73122、HRP单独治疗以及U73122和HRP联合治疗后,AOG mRNA水平明显降低(P均<0.01)。(图3A)2.2 ACE2mRNA表达水平与作为对照组相比较,高血压组大鼠心肌组织ACE2mRNA水平明显降低(P<0.01)。与高血压组相比较,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织ACE2 mRNA水平显著升高(P<0.01)。(图1A)2.3 MAS mRNA表达水平与对照组相比较,高血压组大鼠心肌组织MAS mRNA水平明显降低(P<0.05)。与高血压组相比,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织MAS mRNA水平显著升高(P<0.05)。(图6A)2.4 CollagenⅠmRNA表达水平和对照组相比,高血压组大鼠心肌组织CollagenⅠmRNA水平明显升高(P<0.01)。与高血压组相比,U73122组CollagenⅠmRNA水平变化不明显,但HRP组和U73122+HRP组CollagenⅠmRNA水平明显减低(P<0.01)。(图2A)2.5 CollagenⅢmRNA表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织CollagenⅢmRNA水平显著升高(P<0.05)。与高血压组相比,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织CollagenⅢmRNA水平显著降低(P<0.01)。(图5A)2.6 ReninmRNA表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织Renin mRNA水平明显升高(P<0.05)。与高血压组相比,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织Renin mRNA水平显著降低(P<0.01)。(图4A)3.心肌组织AOG、ACE2、MAS、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Renin及AngⅡ的蛋白表达水平检测3.1 AOG蛋白表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心脏组织AOG蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与高血压组相比,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织AOG蛋白表达水平显著降低(P均<0.01)。(图3C)3.2 ACE2蛋白表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织ACE2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与高血压组相比较,药物干预的U73122组、HRP组、U73122+HRP组大鼠心肌组织ACE2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。(图1C)3.3 MAS蛋白表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织MAS蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与高血压组相比较,药物干预的U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织MAS蛋白表达水平降低不明显(P<0.05)。(图6C)3.4 CollagenⅠ蛋白表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织CollagenⅠ蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与高血压组相比较,药物干预的U73122组、HRP组、U73122+HRP组大鼠心肌组织CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。(图2C)3.5 CollagenⅢ蛋白表达水平与对照组相比,高血压组大鼠心肌组织CollagenⅢ的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与高血压组相比较,U73122组、HRP组和U73122+HRP组大鼠心肌组织CollagenⅢ蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。(图5C)3.6 Renin蛋白表达水平与空白组相比,高血压组大鼠心肌组织Renin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与高血压组相比较,药物干预的HRP组大鼠心肌组织Renin蛋白表达水平变化不明显,而U73122组和U73122+HRP组蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。(图4C)3.7 AngⅡ蛋白表达与作为空白的假手术组相比,高血压组大鼠心肌组织AngⅡ蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与高血压组相比较,药物干预的HRP组大鼠心肌组织AngⅡ蛋白表达水平变化不明显,而U73122组和U73122+HRP组蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。(图7A)结论1.高血压大鼠心脏中AOG的表达升高,应用HRP和U73122及联合治疗后,表达水平均出现不同程度的降低,表明AOG参与心肌损害过程。2.肾性高血压大鼠心脏中能检测到CollagenⅠ、CollagenⅢ表达均升高,应用HRP和U73122及联合治疗后,表达水平均出现不同程度的降低,表明(P)RR及PLC LC-β3抑制剂可降低心肌组织胶原蛋白的水平,起到降低心脏纤维化风险及保护心脏的作用。3.高血压心肌组织中,ACE2、MAS受体表达水平降低,应用HRP和U73122治疗,引起心肌组织ACE2、MAS受体等因子表达水平升高,并伴有血压下降,表明这两种抑制剂可增加RAS保护性成分ACE2、MAS的表达,从而起到保护心脏的作用。4.在肾性高血压发病过程中,心肌组织Aog、Renin及Ang II表达明显升高,应用HRP和U73122联合治疗导致心肌Aog、Renin及Ang II表达水平降低,表明抑制剂联合应用可降低RAS损伤成分的表达。5.培养正常心肌细胞,运用AngⅡ进行诱导,发现PRR诱导组的表达增多,运用药物HRP、U73122以及药物的联合运用后均发现PRR在心肌中的表达降低。6.应用(P)RR、PLC-b3抑制剂降低RAS损伤性成分活性,对降低血压、减少心血管事件的风险具有重要的生理学意义。