论文部分内容阅读
目的:本实验旨在探索血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达水平与患者接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)严重程度之间的关系,并通过慢病毒转基因技术增强HO-1的表达及研究HO-1高表达减轻aGVHD的机制。为allo-HSCT后aGVHD的预防及治疗提供实验依据和新思路。方法:本研究分成两部分:临床患者部分和实验动物部分。在临床患者部分,收集42例1-4级aGVHD患者及20例未发生GVHD的患者在接受allo-HSCT成功后第30天复查时的骨髓血及外周血,并提取其单个核细胞,同时收集30例健康供者作为对照组。采用Realtime PCR法检分别检测各组骨髓血及外周血单个核细胞HO-1基因表达水平。在实验动物部分,以C57BL/6小鼠为供鼠,BALB/c为受鼠,建立小鼠异基因移植模型即a GVHD组,移植24小时后分别通过小鼠尾缘静脉输入HO-1基因修饰的间充质干细胞(MSC)即MSC-HO-1-ZsGreen组或转染空载体的MSC即MSC-ZsGreen组。只移植骨髓细胞的小鼠设为对照组(Control)。移植14天后免疫组化观察MSC-HO-1-ZsGreen组和MSC-Zs Green组小鼠靶器官中MSC定植情况,病理切片HE染色观察各组小鼠靶器官的组织结构损害程度,同时采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏及淋巴结细胞中TH17与Treg细胞数。Realtime PCR法分别检测各组小鼠脾脏组织中IL-17A、ROR-γt、Foxp3mRNA表达水平。结果:我们发现0-1级aGVHD组患者移植成功后第30天复查骨髓血及外周血单个核细胞的HO-1mRNA表达水平明显高于3-4级aGVHD患者及正常供者的表达水平,而3-4级aGVHD患者HO-1mRNA表达水平与正常供者无明显差异。受鼠接受异基因移植14天后,免疫组化结果示MSC-HO-1-ZsGreen组小鼠主要靶器官HO-1蛋白的表达明显高于MSC-ZsGreen组小鼠,总体生存率明显高于其余组,且临床评分、病理评分及体重下降程度明显低于其余组。流式细胞分析结果显示相比其余各组,MSC-HO-1-ZsGreen组小鼠脾脏及淋巴结中TH17细胞数最少而Treg细胞数最多。且脾脏组织中ROR-γt、IL-17A mRNA的表达水平明显低于其余各组,而Foxp3 mRNA的表达水平明显高于其余各组。结论:受者在接受allo-HSCT成功后30天复查骨髓血及外周血单个核细胞HO-1mRNA的表达水平高可能提示之后不易发生严重的aGVHD,HO-1高表达可能通过调节TH17/Treg细胞免疫平衡减轻aGVHD的严重程度。