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背景高迁移率组蛋白1(High mobility group box1, HMGB1)是一种DNA结合蛋白,是损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns, DAMPs)的重要成员之一,在多数肿瘤、炎症疾病中呈现高表达,与细胞自噬、DNA损伤修复、炎症因子释放等生理或病理过程关系密切。作为细胞应激的产物,HMGB1与包括病毒在内的病原体感染关系密切,近来研究显示,HMGB1与HCV、HIV、HBV等多种病毒在细胞内的复制拷贝相关。人T淋巴细胞白血病病毒1型(adult T-cell leukemia virus1, HTLV-1)是一种嗜T细胞的逆转录病毒,可导致成人T淋巴细胞白血病(Adult T-cell leukemia,ATL),研究表明病毒载量是T细胞恶性转化的关键因素,本课题组之前的研究表明HMGB1与HTLV-1感染后T细胞的活化相关,但是关于HTLV-1病毒载量与HMGB1之前的研究并无报道。目的探讨胞外的HMGB1对HTLV-1感染的T细胞中病毒复制的影响方法1.实验分组：本实验设置4组,分别为：(1)空白组：即正常细胞,未做任何处理(2)实验组1：即用rHMGB1处理的细胞(3)实验组2：即用HMGB1的多克隆抗体处理的细胞(4)同型抗体对照组：即用HMGB1的多克隆抗体的同型对照抗体处理的细胞。同时每组设置3个复孔,每批实验重复3次。2.细胞培养：Jurkat、MT2、MT4、MOLT4细胞培养于含有15%灭活的小牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、25mM Hepes、2mM L谷氨酰胺的RPMI1640培养基中,在含有5%的CO□培养箱中培养,每3天换液1次,调整细胞密度不超过5×1105/mL,取对数生长期细胞进行实验。3.细胞转染：在24孔细胞培养板中用Tfx-50转染试剂将pHTLV-1-LTR-luc质粒转染MT2细胞,并用0.03,0.1,0.3μg/m rHMGB1、0.25,0.50,0.75μg/ml rHMGB1pAb及其同型对照抗体处理,48小时后,检测荧光素酶的活性。4.药物处理：用0.3μg/ml rHMGB1、0.25μg/ml rHMGB1pAb及其同性对照抗体处理MT2,24小时候收集细胞,提取RNA检测基因表达情况。5.指标检测：ELISA检测HTLV-1阴性及阳性T细胞系培养上清HMGB1水平,定量PCR检测过表达或阻断HMGB1对病毒复制的影响,免疫印迹检测HTLV-1编码的特异性蛋白。6.统计学分析：实验数据用SPSS12.0软件进行分析,实验结果以均数士标准差(x△-士s)表示,并用单因素方差分析和独立样本t检验进行数据统计,p<0.05为差异有统计学意义,p<0.01为差异显著。结果1. ELISA结果显示,HTLV-1病毒阴性T细胞系和HTLV-1病毒阳性细胞系培养上清中的HMGB1水平无明显差异。2. Western Blot结果显示,MT2细胞表达病毒编码的蛋白Tax、p19, MT4细胞仅表达Tax蛋白,p19蛋白检测不到,HTLV-1病毒阴性细胞Jurkat和MOLT4细胞不表达Tax及p19蛋白。3.萤光素酶报告基因结果显示,rhHMGB1可明显促进HTLV-1-LTR的转录活性,HMGB1pAb均可抑制HTLV-1-LTR的转录活性。4.定量PCR结果显示,HMGB1pAb可明显抑制HTLV-1结构基因gag、env、 poll、pol2的表达,而rhHMGB1则可明显促进结构基因ag、env、poll、pol2的表达。结论胞外的HMGB1可促进HTLV-1病毒感染T细胞的病毒复制