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从自然罹病死亡的甜菜夜蛾中分离得到一株甜菜夜蛾的致病菌QL-1,并经过16S rDNA同源性比较、生理生化特征分析将其鉴定为肠杆菌科(Enterobacteriaceae),沙雷氏菌属(Serratia)的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).通过文献检索获得已发表的Serratia marcescens的几丁质酶基因序列,并进行同源性分析,然后以此为依据设计引物,以QL-1染色体DNA为模板,用PCR技术扩增了编码几丁质酶的基因片段.将PCR产物纯化后用HindⅢ和BamHI双酶切,与经过相同酶切处理的pUC19连接.连接产物转化E.coli JM 109,在含有氨苄青霉素的麦康凯培养基平板上筛选到阳性转化子,然后通过点种几丁质平板验证.通过测序,发现所克隆基因最长的ORF的长度为1692bp,编码一条具有563个残基的多肽链.将所克隆基因提交GenBank,其登录号为AY433954.将此重组质粒命名为pS11.计算出分子量大约为61.017kD,pI为6.56.通过分子生物学软件和生物信息学服务器,对核苷酸序列及其编码的蛋白质序列进行了初步的序列分析和比较,发现在蛋白质序列的N-端存在典型的信号肽序列,在C-端还存在另外两个结构域即PKD区和几丁质酶催化区.含有重组质粒pS11的转化子细胞E.coli的粗酶提取液,在pH6.5处测得其胞外、周质空间和胞内的酶活分别为25U/mg(5﹪)、86 U/mg(16﹪)和412 U/mg(79﹪).IPTG对pS11上几丁质酶基因的表达有一定促进作用,当IPTG浓度为0.2mM时,所产生的几丁质酶的比活最高.为了研究几丁质酶基因在芽孢杆菌中的表达情况,又将几丁质酶基因片段亚克隆到大肠杆菌-芽孢杆菌的穿梭质粒pMA5上,先将chiA-2用BamHI酶切,与经过相同酶切处理的pUC19连接,然后通过PvuⅡ和HindⅢ双酶切来筛选几丁质酶基因片段反向插入的重组质粒,并命名为pS12.将pS12上的几丁质酶基因经HindⅢ和KpnI双酶切后,与经过相同酶切处理的pMA5载体连接,构建重组质粒pMA5-chiA.然后将重组质粒pMA5-chiA用SstI酶切去除与表达无关的片段,自连后,连接产物转化枯草芽孢杆菌BS168、BCL1050,在卡那霉素抗性平板上筛选阳性转化子,并将此重组质粒命名为pMA5-chiA-2.从筛选到的转化子测得几丁质酶基因得到了较高水平的表达,在BCL1050中的表达量是在BS168中的1.3倍,约达到出发菌的87.6﹪.几丁质酶基因的克隆和高效表达对于构建生防工程菌,研制高效生物农药的应用研究具有重要意义.