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ΔS2 SF1b PRLR(Delta S2 short form 1b prolactin receptor)是SF1b PRLR的一种变体,由Tan等首次在人乳腺癌及前列腺癌等细胞中发现并报道,因其丢失S2结构域,故将其命名为“ΔS2 SF1b PRLR(ΔS2 SF1b)”。我们推测,S2结构域的缺失改变了SF1b PRLR的分子特性,可能引起下游信号通路及细胞转导途径中相关micro RNA的改变。本研究旨在研究过表达ΔS2 SF1b PRLR和SF1b PRLR对人乳腺癌细胞MCF7的增殖及micro RNA表达的影响,并比较二者的差异,着重分析差异micro RNA,探讨其分子调控机制。本研究将携带ΔS2 SF1b PRLR及SF1b PRLR c DNA的慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF7,嘌呤霉素筛选后得到稳转细胞株MCF7-ΔS2 SF1b PRLR(ΔS2 SF1b)、MCF7-SF1b PRLR(SF 1b),将空白对照MCF7-Con(Con)与得到的稳转株培养后进行:(1)细胞增殖测定(MTS方法);(2)提取总RNA,进行micro RNA高通量测序,并比较三组稳转细胞micro RNA的表达差异。对差异表达的micro RNA进行筛选和预测,得到有意义的micro RNA,并对差异micro RNA进行GO和KEGG功能显著性富集分析。细胞增殖测定(MTS)显示:(1)过表达ΔS2 SF1b能显著促进人乳腺癌细胞(MCF7)增殖,与对照组(Con)细胞(OD:1.04±0.11)相比,ΔS2 SF1b组细胞增殖速率增加66.35%(OD:1.73±0.11,P<0.05),高于SF1b组细胞OD:1.44±014,P<0.05)。高通量测序结果表明,ΔS2 SF1b过表达显著改变人类乳腺癌细胞MCF7的micro RNA表达谱:(1)仅在ΔS2 SF1b组表达(Con组及SF1b组细胞不表达)的micro RNA有96种,仅在SF1b组表达(Con组及ΔS2 SF1b组细胞不表达)的micro RNA有50种。(2)相较于Con组,SF1b和ΔS2 SF1b组分别有245和206种micro RNA表达升高,分别有304种和277种micro RNA表达降低(p≤0.05)。(3)ΔS2 SF1b与SF1b组细胞间micro RNA表达存在明显差异,ΔS2 SF1b过表达导致hsa-mi R-125a-5p＿R-1、hsa-mi R-99b-5p、hsa-mi R-27b-5p表达明显升高(P<0.05),而过表达SF1b却无此作用;SF1b过表达对hsa-mi R-24-3p＿R-2、hsa-mi R-27a-3p＿R-1表现出明显的抑制作用,而ΔS2 SF1b则导致其升高;此外,与对照组细胞相比,过表达SF1b对hsa-mi R-139-5p有明显抑制作用(P<0.05),而ΔS2 SF1b则完全阻止其表达(表达值为0)。GO功能和KEGG富集分析显示,ΔS2 SF1b与SF1b组的差异表达的micro RNA,其靶基因主要富集MAPK、PI3K-Akt,但AMPK、m Tor、insulin、Fox O、Hippo、Erb B、TNF等信号通路的丰度较高。(4)对micro RNA进行预测发现:(1)PC-3p-2776＿684、PC-5p-3033＿620等在ΔS2 SF1b组细胞中的表达量明显升高,在SF1b组中升高不明显;(2)PC-5p-52538＿16、PC-5p-51117＿17、PC-5p-75774＿8在ΔS2 SF1b组中少量表达,在SF1b组及Con组完全不表达;(3)PC-5p-33907＿35在SF1b组中表达降低,在ΔS2 SF1b组中完全不表达。其中PC-5p-33907＿35的表达趋势与mi R-139完全一致,ΔS2 SF1b组中完全不表达,提示ΔS2 SF1b明显促进乳腺癌细胞增殖可能与mi R-139、PC-5p-33907＿35的表达量下调甚至不表达有关。根据结果,得出以下结论:(1)S2结构域的丢失导致SF1b的促乳腺癌细胞增殖作用显著升高,S2结构域是维持SF1b PRLR的分子功能的重要结构基础。(2)与对照组细胞相比,ΔS2 SF1b及SF1b过表达后,其micro RNA表达谱均发生显著改变,且ΔS2 SF1b及SF1b组细胞之间的micro RNA表达谱亦明显不同,说明S2结构域的存在与否能够显著改变SF1b PRLR下游信号通路并进而导致生物学效应的显著改变,两者在人类乳腺癌的形成、发展及预后中具有不同的作用。