螺内酯对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

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目的:探讨螺内酯(spironolactone,SPI)对人白蛋白(albumin,Alb)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化的影响,以及该过程是否通过TGF-β1/Smads信号通路发挥作用。方法:体外培养人HK-2细胞,待长满至80%~85%后同步24小时,随机分为7组:A组(未加刺激物)、B组(加入10-7mol/l螺内酯)、C组(加入5mg/ml白蛋白)、D组(5mg/ml白蛋白+10-8mol/l螺内酯)、E组(5mg/ml白蛋白+10-7mol/l螺内酯)、F组(5mg/ml白蛋白+10-6mol/l螺内酯)、G组(先加10umol/lTGF-β1拮抗剂+30min后加入5mg/ml白蛋白)。采用RT-PCR检测TGF-β1和ILK的mRNA表达;细胞免疫荧光检测α-SMA蛋白、E-cadherin蛋白的表达;ELISA法检测细胞上清液中的FN蛋白水平。结果:光镜下观察细胞细胞形态变化发现,正常HK-2为椭圆形或梭形,呈鹅卵石样排列;受刺激后细胞胞体变长,细胞间隙变大。RT-PCR检测结果表明:C组TGF-β1和ILK的mRNA较其他各组表达明显增高(P﹤0.01);D组、E组、F组TGF-β1和ILK的mRNA表达逐渐下降,两组间比较差异有显著性(P﹤0.05);与C组比较,G组TGF-β1mRNA表达无显著差异(P﹥0.05),而ILKmRNA表达明显下降(P﹤0.01)。细胞免疫荧光检测结果显示:C组α-SMA蛋白表达较其他各组明显增高,而E-cadherin表达则明显下降(P﹤0.01);D组、E组、F组α-SMA蛋白的表达逐渐下降,E-cadherin蛋白的表达逐渐增高(P﹤0.05);与C组比较,G组E-cadherin和α-SMA蛋白的表达有显著差异(P﹤0.05)。ELISA检测结果表明:C组细胞上清液中FN蛋白的水平显著高于其他各组(P<0.01);D组、E组、F组FN蛋白的水平逐渐降低(P<0.05);与C组比较,G组FN蛋白的水平存在显著差异(P﹤0.05)。结论:一定浓度的人白蛋白可以诱导体外培养的HK-2细胞发生上皮细胞-间充质转分化;螺内酯可一定程度上抑制人白蛋白诱导HK-2细胞发生转分化,且呈剂量依赖;TGF-β1/Smads信号通路可能是此过程中的重要通路。
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