犬白介素-21基因的扩增、克隆与序列分析

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白细胞介素(interleukin,IL) 又称白细胞间素,简称白介素,最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子,但是后来发现白细胞介素亦可由其他细胞产生,也能作用于其他细胞。当今所指的白细胞介素是指由活化的单核-巨噬细胞及淋巴细胞等所产生的一类细胞因子,它作用于淋巴细胞、巨噬细胞或其他细胞,负责信号传递,联络白细胞群的相互作用,在细胞的活化、增殖和分化中起调节作用。白细胞介素与相应细胞的结合,这种连续的细胞因子与细胞间相互作用,可以扩大和调节免疫应答。 白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)是一种新近发现的细胞因子,2000年美国华盛顿大学的Julla等通过构建一个具有预测信号肽和两性分子螺旋的表达序列时发现了一段编码Ⅰ类细胞因子受体的cDNA序列,将其编码的蛋白质正式命名为白细胞介素21受体(IL-21R),随后从活化的人CD3+T细胞中成功克隆出白细胞介素21的基因。 自IL-21被发现以来,由于其重要的生物学功能,受到了全世界医学工作者的瞩目。迄今为止,IL-21的许多生物学功能已被发现并公布于众。IL-21可以通过抗-CD4抗体共刺激促进成熟B细胞的增殖;IL-21通过抗-CD3抗体共刺激增强Tcell的增殖;在体外,IL-21能增强来源骨髓的N K细胞的增殖和成熟,N K细胞参与恶性肿瘤的天然免疫系统的监视,因而有助于控制转移性肿瘤;这些细胞对抗微生物病原体(尤其是病毒)的天然免疫力也是必需的;它们还影响骨髓移植后移植物抗白血病效果,并参与调节造血功能。说明IL-21具有广泛的治疗用途。诸如防御细菌及病毒感染,治疗自身免疫病,增强疫苗效力等。正因为如此,IL-21有很大的开发潜力和重要的生产实践意义。 本研究通过对分离到的犬白细胞的RNA进行反转录PCR扩增,而后将纯化回收的PCR产物与T载体连接,筛选到阳性克隆后,经序列测定,得到了犬白细胞介素21的基因编码序列。再用DNAstar分析软件,与已发表的人和家鼠的白细胞介素21的基因编码序列,进行核苷酸和氨基酸序列的比较分析,结果表明,犬IL-21与人IL-21的核苷酸和氨基酸同源性最高(88.9%),而犬与家鼠的IL-21的核苷酸和氨基酸的同源性相对要低(77.1%)。说明犬与人的白细胞介素21的亲缘关系较近,而犬与家鼠的亲缘关系相对要远一些。 由于犬白介素21对于动物机体具有非特异性的免疫增强活性,因而,它可以和许多种类的核酸疫苗进行联合使用。现阶段核酸疫苗的免疫效果总是差强人
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