中国部分地区临床孢子丝菌菌种鉴定及体外药物敏感性分析

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第一章中国部分地区临床孢子丝菌菌种鉴定目的:对分离自我国部分地区的50株临床孢子丝菌进行菌种鉴定。方法:分离菌株分别进行25℃恒温培养和玻片小培养,肉眼和镜下观察形态特征;同时提取菌丝相基因组DNA,用PCR分别扩增部分微管蛋白(β-tubulin)基因和核糖体内部转录间隔区(Ribosomal Internal Transcribed Spacer,ITS),扩增产物进行测序,并采用最大似然法(maximum likelihood,ML)和邻接法(neighbor-joining,NJ)构建联合β-tubulin基因和ITS区域的系统发育树。结果:结合形态学及系统发育分析,50株菌均鉴定为球形孢子丝菌(Sporothrix globosa,S.globosa)。结论:S.globosa是目前我国地区孢子丝菌病的主要致病菌种,为进一步明确我国病原菌种的分布提供了依据。第二章中国部分地区临床球形孢子丝菌菌丝相药物敏感性分析目的:体外检测我国临床S.globosa菌丝相对5种抗真菌药物的敏感性,同时对比来自我国不同地区临床菌株的药物敏感性。方法:将重庆、吉林、北京地区基因鉴定为S.globosa的100株临床菌株接种于2%土豆葡萄糖琼脂培养基(PDA)上,25℃恒温培养7d获得菌丝相。按照美国临床与实验室标准协会(CLSI)制定的M38-A2方案,采用微量液基稀释法检测菌丝相对碘化钾(Potassium iodide,KI)、伊曲康唑(Itraconazole,ITC)、特比萘芬(Terbinafin,TRB)、氟康唑(Fluconazole,FLC)、两性霉素B(Amphotericin B,AMB)的体外最低抑菌浓度(MIC)。质控菌株为近平滑念菌ATCC22019。结果:KI体外无抗真菌活性,TRB的MIC几何均值为0.14μg/m L,ITC和AMB的MIC几何均值分别为0.79μg/m L和0.63μg/m L,FLC的MIC几何均值为45.89μg/m L。发现7株对ITC耐药的菌株,吉林地区相对较多,但不同地区菌株的药物MIC值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:KI无体外抗真菌活性,我国临床S.globosa对TRB最敏感,其次为ITC和AMB,对FLC敏感性最差,不同地区菌株对抗真菌药物的敏感性没有明显差异。
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