流感主要是由流感病毒引起的发热性呼吸道感染疾病。全世界每年有超过500万重症流感患者,其中导致29-65万人死亡。流感的爆发不仅严重威胁人类健康,而且还对全球经济和生态系统造成破坏性的影响。流感病毒是属于正黏病毒科家族的负链RNA病毒,根据其核蛋白和基质蛋白的不同,主要分为三种类型:甲型、乙型和丙型流感病毒。由于甲型流感病毒具有更高更强的抗原变异性,因此其对人类健康具有重大威胁。其中高致病禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）H5N1是甲型流感病毒亚型之一,其感染人后具有更高的致死率（60%）,对人类健康和生态平衡具有严重的威胁。目前,美国FDA批准的抗流感病毒药物仅有6个,2个M2质子通道抑制剂（金刚烷胺和金刚烷乙胺）、3个神经氨酸苷酶抑制剂（扎那米韦、奥司他韦和帕拉米韦）和1个RNA依赖RNA聚合酶抑制剂（索夫鲁扎）。近年来,对M2质子通道抑制剂和神经氨酸苷酶抑制剂耐药的H5N1病毒株的频繁出现使得研发新型结构骨架、新靶点的抗流感病毒药物迫在眉睫。基于前期的抗病毒研究工作,我们首次发现了一类基于呋喃甲酰胺新型结构骨架的H5N1抑制剂。最后,通过系统的构效关系研究,我们发现对甲型流感病毒H5N1抑制活性最好的化合物III-7a,EC50值为1.25μM,与阳性对照药物金刚烷胺相当。初步的机制研究表明,该系列呋喃甲酰胺类化合物作用于病毒复制的早期阶段,与M2质子通道抑制剂相似,可能是通过抑制M2质子通道功能进而阻止病毒粒子脱壳。基于呋喃甲酰胺类H5N1小分子抑制剂的研究基础上,通过系统分析该系列呋喃甲酰胺类化合物构效关系和计算机分子模拟结果,我们发现呋喃甲酰胺系列活性最好的化合物III-7a由于链长过长,并不能很好填充M2质子通道蛋白的空腔。通过保留硫原子并缩短链长,我们设计了以苯磺酰胺为核心骨架,基于芳杂环的苯磺酰胺类系列1化合物。其中活性最好的化合物IV-6k的EC50值为0.47μM,与呋喃甲酰胺类活性最好的化合物III-7a相比,抗H5N1活性提高了约2.6倍。此外,基于计算机辅助药物设计和经典的药物化学设计理念,通过在磺酰胺氮原子上进一步引入氰基侧链,使其更好填充M2蛋白空腔,我们还设计合成了基于氰基侧链的苯磺酰胺类衍生物并对其进行了生物活性测试。我们发现,在引入氰基侧链后,该系列苯磺酰胺类化合物普遍具有很好的抗流感病毒活性。其中抗H5N1活性最好的化合物V-3h的EC50值为0.006μM,选择性指数SI(EC50/CC50)高达33543。基于本课题组苯甲酰肼类EV71抑制剂的研究工作,我们首次发现苯甲酰肼类衍生物在MDCK细胞上对野生型H5N1病毒株具有很好的抑制活性。其中活性最好的化合物VI-5a、VI-5d、VI-5e和VI-5p的EC50值分别为0.034μM、0.037μM、0.031μM和0.046μM。此外,免疫印迹实验表明,该系列化合物对野生型H5N1病毒株和金刚烷胺耐药H1N1病毒株均具有很好的抑制活性。初步的机制研究表明,该系列化合物可能是通过作用于甲型流感病毒RNA依赖RNA聚合酶,进而抑制流感病毒的复制。综上,我们开发了系列新型骨架的小分子H5N1抑制剂,并在细胞水平上对其抗流感病毒活性及初步的作用机制进行了研究。针对基于氰基侧链的苯磺酰胺类M2质子通道抑制剂和苯甲酰肼类RNA依赖RNA聚合酶抑制剂的深入机制研究及动物水平的药效学和药代动力学实验等研究仍在进行中,期望得到高效低毒且机制确切的抗流感病毒小分子抑制剂,以用于流感的预防和治疗,解决抗流感药物耐药性问题。