背景：卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤。因其发病隐匿，很容易转移，且极易复发，死亡率高居女性生殖系统肿瘤首位。加之现阶段预防和治疗手段的不足，5年生存率低下，严重威胁女性生活质量，给家庭社会带来巨大负担。随着对该病认识的发展，已证实卵巢癌发生发展的重要病理基础是其活跃的血管生成，它影响着肿瘤的侵袭转移以及疾病转归。近期研究证明，内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)在血管生成中居于关键环节，血管内皮细胞可能由骨髓来源的循环EPCs掺入并分化而来。基于此本课题组提出假设：卵巢癌中肿瘤细胞与EPCs共处局部微环境，肿瘤细胞通过分泌多种细胞因子或表达相关活性酶类与EPCs作用，促进肿瘤的血管生成。本研究拟在体外通过抑制卵巢癌细胞环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表达，通过非接触共培养的方式观察其对EPCs迁移趋化能力的影响。目的：通过环氧化酶抑制剂舒林酸来抑制卵巢癌SKOV-3细胞COX-2的表达，然后与EPCs共培养观察其迁移趋化能力的变化，并初探可能的机制。方法：1.运用密度梯度离心法分离脐血中的单核类细胞，联合应用生长因子促进目的细胞生长和贴壁筛选法纯化细胞，后经双荧光染色法和免疫荧光技术鉴定该脐血来源的细胞；2.采用阶梯式浓度的舒林酸作用于卵巢癌SKOV-3细胞不同时间，经RT-PCR和WB检测COX-2表达情况，并做多因素方差分析，找出抑制作用最明显的组合；3.在体外共培养卵巢癌COX-2受抑SKOV-3细胞和EPCs，采用对比观察法比较EPCs迁移趋化能力的变化，并检查细胞中HPA表达量和培养液中VEGF含量；关联分析COX-2、HPA、VEGF与EPCs迁移数量的关系。结果：1.EPCs初期以圆形细胞为主；第3天后开始做贴壁生长，略呈梭状；第7天开始逐渐形成细胞集落，第14天开始出现典型“铺路石”形态。对EPCs进行FITC-UEA-1和DiI-Ac-LDL摄取功能鉴定，呈双阳性。免疫荧光检测EPCs表面标志CD34和CD133均呈阳性反应。2.采用环氧化酶抑制剂舒林酸处理卵巢癌SKOV-3细胞，RT-PCR结果显示药物与抑制效率间存在量效-时效关系。然后选取抑制作用较强的3个组合再次作用与卵巢癌SKOV-3细胞，行WB检测COX-2蛋白表达情况，结果显示:当舒林酸为2mmol/L处理48h时，COX-2表达下降最为显著。3.体外观察到卵巢癌COX-2受抑细胞可使EPCs迁移趋化能力明显降低，COX-2、HPA、VEGF分别与EPCs迁移数量相关；且COX-2表达量分别与HPA、VEGF表达量相关。结论：1.经过分离培养鉴定脐血来源的单核细胞，成功获得EPCs；2.经过舒林酸处理卵巢癌SKOV-3细胞，确能使COX-2表达受抑制，成功构建卵巢癌细胞COX-2的抑制模型；3.最后在体外观察到卵巢癌COX-2受抑细胞可使EPCs迁移趋化能力明显降低，且此作用可能与体系中的HAP、VEGF含量降低有关。