microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子，在转录后水平调节基因的表达，并在细胞的繁殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。现在已经公布了108条牛的miRNA。寻找牛更多的miRNA分子并确定其靶基因，或者寻找作用于重要基因的miRNA分子，为研究牛的胚胎发育及转基因牛的制备提供有价值的科学数据，已经成为研究热点。 本研究将人、小鼠、猪、狗、绵羊五种哺乳动物的miRNA分子与牛的基因组对比，预测得到了147条可能新miRNA分子。但是预测获得的miRNA分子必须通过实验方法证明其表达。而利用小分子RNA克隆的方法则可以直接对miRNA分子进行大量扩增，测序后便可寻找出新的miRNA分子。本实验从牛的脑和肝脏组织中克隆得到了13条新的miRNA分子，其中有8条miRNA 分子与运用同源对比预测得到miRNA分子相同，充分说明了这两种方法均可行和有效。根据miRNA的作用机理，将牛的原有的与可能的新miRNA分子与牛Oct-4mRNA 3’UTR比对，找到了5条调控Oct-4基因的候选miRNA 分子。首先使用人工合成化学修饰的miRNA 分子转染表达RFP-3’UTR的转基因COS7细胞，观察荧光变化初步确定miRNA-146b和204具有调控作用；然后构建miRNA表达载体再次转染转基因COS7细胞，通过FACS检测，证明这两条miRNA分子确实对具Oct-4具有调控作用。本实验从寻找牛新的及作用于Oct-4的miRNA分子开始，通过两个层次的实验，验证了miRNA-146b和204具有调控Oct-4的作用，这将有助于进一步研究miRNA在胚胎发育中的作用。