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伪狂犬病毒(PRV)是α疱疹病毒亚科的重要成员之一，具有嗜神经性和潜伏感染性，给养猪业造成巨大的经济损失。在伪狂犬病毒的急性感染期或者裂解感染期，被膜蛋白VP16通过与宿主的细胞因子Oct-1和HCF-1结合从而激活立即早期基因IE180的转录和表达，进而调控一系列下游基因的表达和病毒的增殖。主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)可以识别和递呈病毒编码的内源性蛋白，发挥抗病毒免疫作用。 病毒编码的microRNA(miRNA)在病毒生命周期中参与调控病毒基因的表达和病毒的增殖，也可以调控宿主细胞的凋亡、代谢和免疫。先前，我们实验室报道了PRV的长潜伏感染相关基因(LLT)可以编码11个成熟的miRNAs，但是这些miRNAs的具体功能还不清楚。本研究选择了病毒复制关键基因和宿主免疫识别基因作为研究对象，希望通过发掘作用于这些重要基因的miRNA，加深对病毒致病机理的认识，为开发新的疫苗或药物提供理论指导。具体研究内容如下: 1.通过生物信息学软件预测筛选到prv-mir-LLT7既可以结合MHCⅠ基因的3UTR又可以结合PRV的VP16基因的3UTR，其中prv-mir-LLT7在VP16的3UTR中有2个作用位点;预测筛选到PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT7、prv-mir-LLT8、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11等5个miRNRs可以作用于IE180基因。 2.为了验证MHCⅠ基因和VP16基因是否被prv-mir-LLT7直接调控和确定prv-mir-LLT7作用MHCⅠ基因和VP16基因的位点，本研究使用双荧光素报告实验证实了prv-mir-LLT7既可以作用于MHCⅠ基因又可以作用于VP16基因，其中prv-mir-LLT7在VP16的3UTR中有2个作用位点。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和流式细胞检测实验，发现prv-mir-LLT7可以下调MHCⅠ基因的转录和翻译。通过qRT-PCR和western blot实验，发现prv-mir-LLT7可以下调VP16的转录和翻译;随后进一步检测发现prv-mir-LLT7还能够下调IE180的转录和翻译;通过miRNA inhibitor抑制prv-mir-LLT7后，qRT-PCR和western blot实验结果表明prv-mir-LLT7 inhibitor可以抑制prv-mir-LLT7对MHCⅠ和VP16基因的调控。 3.我们使用qRT-PCR方法检测PRV感染上皮细胞后的prv-mir-LLT7的表达谱，分析了prv-mir-LLT7的表达与prv-mir-LLT7作用于MHCⅠ和VP16的相关性。通过一步生长曲线实验，结果显示prv-mir-LLT7在细胞感染PRV后9h时候可以降低PRV增殖。 4.为了验证病毒编码的5个miRNAs是否直接作用IE180基因，本研究使用双荧光素酶报告实验。点突变实验和剂量依赖实验实验结果显示PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11可以直接作用于IE180基因。通过western blot实验，发现PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11下调IE180的表达。 综上所述，PRV编码的prv-mir-LLT7可以调控猪的MHCⅠ基因和病毒的VP16基因的表达。该病毒编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11可以下调IE180基因的表达。我们推测α疱疹病毒进化了一个精妙和经济的维持合适感染状态策略。