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目的:体外分离、培养扩增BMSCs并移植治疗血管性痴呆大鼠,初步探讨其治疗血管性痴呆的有效性及可行性,为临床治疗血管性痴呆提供理论依据。
方法:
1、细胞培养:采用密度梯度离心法分离出BMSCs,在DMEM培养基中传代培养扩增;
2、实验动物分组:24只经Y型电迷宫筛选的健康SD大鼠随机分为假手术组(8只)、PBS移植组(8只)、BMSCs移植组(8只),采用2-AO法制作血管性痴呆大鼠模型;
3、细胞移植:用终浓度10ug/ml的Brdu标记第四代BMSCs,培养三天后调细胞浓度为3×10<6>/ml供移植用。术后1天将1mlBMSCs悬液经尾静脉移植入模型大鼠体内,1mlPBS注射入对照组大鼠体内,假手术组不做任何移植;
4、行为学评价:于术后30天用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力;
5、组织学检查:于术后30天行脑灌注固定取材,相邻切片分别采用免疫组化SABC法检测Brdu、Nestine、VEGF阳性细胞数,以Ⅷ因子标记新生血管计数微血管密度(MVD)。
结果:采用密度梯度离心法成功分离出BMSCs,并在体外大量扩增培养;BMSCs移植组、PBS组大鼠学习记忆能力较假手术组下降,BMSCs移植组大鼠学习记忆能力较PBS组改善,差别有统计学意义(P<0.01);BMSCs移植组大鼠皮质额区可检测到Brdu阳性细胞,假手术组和PBS组未检测到Brdu阳性细胞:BMSCs组、PBS组大鼠皮质额区可检测到Nestine阳性细胞,且BMSCs组阳性细胞多于PBS组,差别有统计学意义(P<0.01);三组大鼠皮质额区均可检测到VEGF阳性细胞,且BMSCs组VEGF阳性细胞多于假手术组和PBS组,以Ⅷ因子标记计数微血管密度(MVD),BMSCs组高于假手术组和PBS组,差别有统计学意义(P<0.01)。
结论:
1、BMSCs可在体外大量培养扩增,经静脉途径移植入血管性痴呆大鼠体内,可在体内存活并迁移;
2、BMSCs移植可明显改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,促进神经干细胞的增殖;
3、促进血管生成、改善局部缺血可能是.BMSCs移植治疗大鼠血管性痴呆的重要保护机制之一。