【摘 要】
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目的探讨DKK1通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。方法人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a过表达组,DKK1组和对照组。Wnt3a过表达组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人LECs系SRA 01/04细胞中,构建PCO的
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目的探讨DKK1通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。方法人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a过表达组,DKK1组和对照组。Wnt3a过表达组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人LECs系SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。DKK1组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入100 ng/mL DKK1,对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达;CCK-8实验检测DKK1对SRA 01/04细胞增殖能力的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化;采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子Cyclin D1和C-myc蛋白表达的影响。结果Western blot检测证实,转染pcDNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CCK-8实验结果显示,对照组、Wnt3a过表达组及DKK1组细胞的平均吸光度(A)值间的差异有统计学意义(F分组=10.91,P=0.003),不同时间点两组细胞的平均吸光度(A)值差异也具有统计学意义(F时间=6.041,P=0.025)。DKK1组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为(14.2%±2.3%),明显低于Wnt3a过表达组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a过表达组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞质之中,DKK1组β-catenin蛋白主要分布于细胞质中,少量分布于细胞核中。Western blot检测DKK1组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和C-myc蛋白表达明显低于Wnt3a过表达组。结论在SRA01/04细胞中,DKK1抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和C-myc表达下调,抑制人LECs的增生。
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