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目的:通过体内外实验探讨八宝丹(Babao Dan;BBD)对胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制,为八宝丹的临床应用提供实验依据。方法:体外实验:(1)不同浓度BBD(0、0.25、0.5、0.75 mg/mL)胃癌细胞AGS和MGC80-3,划痕实验和Transwell实验分析细胞迁移能力;Transwell实验分析细胞侵袭能力;粘附实验分析细胞粘附能力。(2)不同浓度BBD(0、0.25、0.5、0.75 mg/mL)干预胃癌细胞AGS和MGC80-3,Q-PCR实验和Western Blot实验检测BBD对EMT相关基因(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9)mRNA和蛋白表达的影响。(3)不同浓度BBD干预后,Western Blot实验检测TGF-β/Smad通路相关蛋白(TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3)表达的影响。(4)加入外源性TGF-β1因子(10 ng/mL)刺激和BBD(0.5 mg/mL)干预细胞后,采用Western Blot实验和Q-PCR实验检测TGF-β1因子和BBD对TGF-β/Smad通路相关蛋白(Smad2/3、p-Smad2/3)和EMT相关基因mRNA和蛋白(E-cadherin、N-cadherin)表达的影响;Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力。体内实验:构建MGC80-3皮下移植瘤裸鼠模型,按瘤体体积随机分为Control组和BBD组(n=10),BBD组给予0.25g/kg灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每周六天,隔天测量裸鼠瘤体体积和体重,四周后处死,取出移植瘤。(1)通过测量移植瘤体积研究BBD对胃癌移植瘤生长的影响,计算裸鼠的平均体重研究BBD对裸鼠体重的影响。(2)采用Q-PCR和Western Blot实验检测瘤体组织中EMT以及TGF-β/Smad通路相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3)表达的影响。(3)通过HE实验评测BBD对裸鼠肝、肾毒性。结果:体外实验:(1)划痕实验和Transwell实验表明BBD能抑制细胞迁移能力(P<0.05或P<0.01);Transwell实验显示BBD能抑制细胞侵袭能力(P<0.05或P<0.01);粘附实验显示BBD能抑制细胞粘附能力(P<0.01)。(2)Q-PCR结果显示BBD能上调E-cadherin而下调N-cadherin的mRNA表达水平且能下调N/E-cadherin的比值(P<0.05或P<0.01);Western Blot实验结果显示BBD能上调E-cadherin的表达(P<0.05或P<0.01),不同程度地下调N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9的水平(P<0.05或P<0.01)。BBD对MGC80-3的Vimentin表达没有影响(P>0.05)。(3)WesternBlot实验结果显示BBD能下调TGF-β1、p-Smad2/3的表达(P<0.05或P<0.01),对Smad2/3的表达无影响(P>0.05)。(4)加入外源性TGF-β1因子刺激后,Western Blot实验结果显示相对于对照组,TGF-β1因子可上调N-cadherin、p-Smad2/3的表达(P<0.05或P<0.01),Smad2/3的表达无影响(P>0.05)。Q-PCR结果显示相对于对照组,TGF-β1因子可上调N/E-cadherin mRMA的比值(P<0.05或P<0.01)。而在BBD干预后,Western Blot实验结果显示相对于TGF-β1组,BBD可下调N-cadherin、p-Smad2/3的表达(P<0.05或P<0.01),对Smad2/3的表达无影响(P>0.05)。Q-PCR结果显示相对于TGF-β1组,BBD可下调N/E-cadherin mRMA的比值(P<0.01)。Transwell实验结果显示,与对照组相比,TGF-β1能够提高细胞迁移能力和侵袭能力(P<0.05或P<0.01);而BBD可以逆转这一作用(P<0.01)。体内实验:(1)裸鼠皮下移植瘤实验显示BBD抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01),但对裸鼠体重无影响(P>0.05)。(2)Q-PCR结果显示BBD组中E-cadherin的mRNA表达无改变(P>0.05),而N-cadherin的表达下调(P<0.05),同时N/E-cadherin的比值下调(P<0.05);Western Blot实验结果显示BBD组中E-cadherin的蛋白表达显著上调(P<0.01),Vimentin、MMP2、MMP9、p-Smad2/3的蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),而N-cadherin、Twist1、ZEB1、ZEB2、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达没有改变(P>0.05)。(3)HE实验结果显示BBD对裸鼠无肝、肾毒性结论:在体外,BBD能够抑制胃癌细胞的迁移、侵袭和粘附能力。在体外,BBD能够抑制胃癌细胞的EMT转化和TGF-β/Smad信号通路的活化并可以通过抑制TGF-β/Smad通路介导的EMT,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。BBD在体内可抑制胃癌细胞的增殖,抑制其EMT转化和TGF-β/Smad信号通路的活化。