本研究旨在调查猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)分离株药物敏感性、耐药基因分布及其遗传亲缘性,进而为治疗和防控APP感染提供理论指导,为畜禽耐药数据库的建立提供部分基础数据。通过PCR等技术分离鉴定来自河南、湖北、江西、陕西、湖南、山西和安徽等7个省份的APP菌株;采用微量肉汤稀释法测试APP对β-内酰胺类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、大环内酯类、酰氨醇类及磺胺类等19种抗菌药物的敏感性,PCR、测序方法检测与各类药物相关的耐药基因、基因环境;运用Southern blot杂交技术对新出现的基因进行遗传定位;使用PFGE方法对APP分离株进行基因分型,分析其遗传亲缘性。从1156份病料组织中成功分离到104株APP,分离率为9.00%。来自河南的分离株最多,其分离率最高,为24.04%(25/1156);江西最少,分离率为5.77%(6/1156);其余省份的分离率在8.65%～21.15%。药敏结果表明,APP对土霉素、磺胺-6-甲氧嘧啶、氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、泰乐菌素和阿莫西林等表现为不同程度的耐药,耐药率分别为75.96%、51.92%、18.27%、18.27%、7.69%、4.81%和3.85%。而对庆大霉素、阿米卡星、替米考星、喹乙醇、林可霉素、黏菌素、复方阿莫西林及头孢噻呋钠等敏感。分析耐药谱发现分离株耐2～3种药物的数量最多,其中数量最多的是OTC+SMM,为20.19%(21/104),而耐4～5种的数量最少,即 OTC+FFC+ENR+SMM 和 OTC+DOX+FFC+ENR+SMM 各为 0.96%(1/104)。耐药基因检测表明,tet(B)、Sul2、floR、Sul3、Sul1、tet(L)、tet(O)、blaROB-1及tet(M)的检出率分别为 64.42%、51.92%、46.15%、43.27%、30.77%、9.61%、6.73%、3.85%和 1.92%。此外,通过反向PCR法得到分别携带blaROM-1和.floR基因的质粒p1144和pA1144,确定blaROB-1的基因环境为blaROB-1-ISApl1,且证明p1 144能够转移至APP敏感菌株中而使其对阿莫西林的抗药性升高8倍。通过Southern blot杂交发现,tet(M)基因位于APP分离株1144的染色体基因组上。PFGE分型表明,104株APP中,有99株可被分为83个PFGE型,提示此分离株以水平方式传播为主。综上,APP的分离率较低,而对土霉素、磺胺-6-甲氧嘧啶、氟苯尼考及恩诺沙星等药物耐药现象较严重,应谨慎使用,同时合理使用多西环素、泰乐菌素及阿莫西林等以防APP对其耐药性进一步增强。tet(B)的检出率最高,而blaROB-1是引起APP对β-内酰胺类抗生素耐药的重要原因。本试验首次在APP中检测到tet(M)基因并定位在染色体基因组上,这表明tet(M)已经在APP分离株中出现,且在对多西环素耐药中发挥重要作用。