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目的:在中医药理论指导下,将熟地黄的传统功效与现代研究结合起来,通过动物实验,对熟地黄及熟地黄多糖的抗焦虑作用进行研究,并对其抗焦虑作用机理进行初步探讨。
方法:采用小鼠明暗箱实验、高架十字迷宫实验研究熟地黄及熟地黄多糖的抗焦虑作用;通过自发活动实验、抗惊厥实验、镇静催眠实验观察其对中枢的抑制性作用;通过薄层扫描测定脑内γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)递质含量,免疫组化法观察受体(GABAAR1、NMDAR1)表达,以探讨其抗焦虑作用的机制。
结果:1.熟地黄及其多糖抗焦虑作用1.1熟地黄抗焦虑作用熟地黄煎液按4g/kg、8g/kg、12g/kg灌胃给予小鼠7天,在小鼠明暗箱焦虑装置上,显示有增加穿箱次数的作用,且呈神经药理学特有的量效曲线;与对照组比较,熟地黄中剂量、地西泮(0.25mg/kg·3d)能显著增加动物的穿箱次数(P<0.01);且二者之间比较无显著性差异(P>0.05)。在小鼠高架十字迷宫装置上,熟地黄可以增加小鼠进入开臂的时间、次数百分比,且呈神经药理学特有的量效曲线;与对照组比较,熟地黄中剂量可以显著增加小鼠进入开臂的次数百分比(P<0.01);地西泮(0.25mg/kg·3d)可显著增加小鼠进入开臂的时间百分比(P<0.05)、次数百分比(P<0.01);熟地黄组与地西泮组比较无显著性差异(P>0.05)。
1.2熟地黄多糖抗焦虑作用熟地黄多糖按0.25g/kg、0.5g/kg、1g/kg灌胃给予小鼠3天,在小鼠明暗箱焦虑装置上,显示有增加穿箱次数的作用,且呈神经药理学特有的量效曲线;与对照组比较,熟地黄多糖中剂量能显著增加动物的穿箱次数(P<0.05);地西泮(0.25mg/kg·3d)能显著增加动物的穿箱次数(P<0.01);且熟地黄多糖组与地西泮组之间比较无显著性差异(P>0.05)。在小鼠高架十字迷宫装置上,熟地黄多糖可以增加小鼠进入开臂的时间、次数百分比,且呈神经药理学特有的量效曲线;与对照组比较,熟地黄多糖中剂量可以显著增加小鼠进入开臂的次数百分比(P<0.05);地西泮(0.25mg/kg·3d)可显著增加小鼠进入开臂的时间百分比、次数百分比(P<0.05);熟地黄多糖组与地西泮组比较无显著性差异(P>0.05)。
1.3熟地黄及熟地黄多糖抗焦虑作用比较在小鼠明暗箱焦虑装置上,与对照组比较,熟地黄多糖(0.5g/kg·3d)、熟地黄(8g/kg·7d)、地西泮(0.25mg/kg·3d)能显著增加动物的穿箱次数(P<0.01);熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。在小鼠高架十字迷宫装置上,熟地黄多糖可以显著增加小鼠进入开放臂时间百分比(P<0.01)、次数百分比(P<0.05);熟地黄可以显著增加小鼠进入开放臂时间百分比(P<0.05)、次数百分比(P<0.01);地西泮可以显著增加小鼠进入开放臂时间百分比(P<0.05)、次数百分比(P<0.01);熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。
1.4熟地黄及熟地黄多糖抗焦虑作用机制研究GABA、Glu含量测定结果:与对照组比较,熟地黄、熟地黄多糖及地西泮均能显著降低小鼠脑组织中Glu含量(P<0.01),并可显著提高GABA含量(P<0.01)。且熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。
GABAAR1、NMDAR1表达测定结果:与对照组比较,熟地黄多糖、熟地黄和地西泮均能使GABAAR1免疫阳性细胞表达增加;NMDAR1免疫阳性细胞表达减少。
2.熟地黄及熟地黄多糖对小鼠的中枢抑制性作用2.1对小鼠自发活动的影响与对照组比较,熟地黄多糖(0.5g/kg·3d)能显著地减少小鼠自主活动次数(P<0.05);熟地黄有减少小鼠自主活动次数作用(P>0.05);地西泮(0.25mg/kg·3d)能显著地减少小鼠自主活动次数(P<0.01);熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。
2.2对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响与对照组比较,熟地黄多糖(0.5g/kg·3d)可显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0.05),延长睡眠时间(P<0.05);熟地黄(8g/kg·7d)可显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0.05),有延长小鼠睡眠时间作用(P>0.05);地西泮(0.25mg/kg·3d)可显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0.05),延长睡眠时间(P<0.01)。熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。
2.3对异烟肼致小鼠惊厥的影响与对照组比较,熟地黄多糖(0.5g/kg·3d)有延缓异烟肼惊厥发作潜伏期的作用(P>0.05);熟地黄(8g/kg·7d)可显著地延缓异烟肼惊厥发作潜伏期(P<0.05);地西泮(0.25mg/kg·3d)可显著地延缓异烟肼致惊厥发作潜伏期(P<0.05);三者均能使60min小鼠内死亡数减少。熟地黄多糖组、熟地黄组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05)。
结论:熟地黄及熟地黄多糖具有抗焦虑作用;并有中枢抑制作用;其作用机制可能是①提高脑内GABA含量,增加脑内GABAAR1的表达;②降低脑内Glu含量,抑制NMDAR1的表达。