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一、猪乳中HMWP-B分离纯化的初探 将SDS-PAGE电泳确定为B带型的二花脸母猪常乳通过离心去除乳脂得到脱脂乳，脱脂乳通过等电点沉淀除去大部分酪蛋白得到乳清。乳清通过硫酸铵分级盐析，收集40％饱和度硫酸铵盐析沉淀，经溶解透析得到HMWP-B的粗提品，纯度达23.5％。利用等电聚焦制备电泳、SephadexG-100凝胶过滤层析、DEAE-52阴离子交换层析、High Q柱阴离子交换层析四种不同方法探索了HMWP-B粗提品的进一步纯化。等电聚焦制备电泳不能将HMWP-B和β-乳球蛋白分开；SephadexG-100凝胶过滤层析不能很好地分离HMWP-B和乳中的免疫球蛋白等大分子蛋白，但对于分离HMWP-B和β-乳球蛋白效果较佳；两种阴离子交换层析行为相似，不能用来一步纯化HMWP-B。 二、猪乳中HMWP-B分离纯化方法的建立 HMWP-B的粗提品经SephadexG-200凝胶过滤层析得到纯度达84.5％的初步纯化的HMWP-B，初步纯化样品再经High Q柱阴离子交换层析得到纯度达92.3％的HMWP-B。 三、HMWP-B多克隆抗体的制备及HMWP的同源性鉴定 用切胶抽提制备的高纯度的HMWP-B和纯化得到的HMWP-B免疫新西兰大白兔获得兔抗HMWP-B的多克隆抗体，琼扩检测效价为1:4，ELISA检测效价为1:1600。运用Western Blot鉴定兔抗HMWP-B多克隆抗体特异性良好，运用ELISA检测兔抗HMWP-B多克隆抗体和乳中的主要蛋白质(酪蛋白)不存在免疫交叉性。 运用Western Blot鉴定HMWP-B为非血缘性，推测其为乳腺自身分泌。SDS-PAGE电泳比较兔乳、牛乳、猪乳，以及Western Blot鉴定证明HMWP为猪乳中所特有。 将兔抗HMWP-B多克隆抗体和HMWP的A带及C带作免疫印迹，结果表明HMWP不同带型之间在免疫学上存在很强的交叉性，说明该组蛋白具有相同的抗原 张海方：猪乳中HMWPB的分离纯化及HMWP的同源性鉴定决定簇，同源性高，这可以成为证明 HMWP多态性假说有力和可信的证据。