PEG-硫酸铵及可回用两水相体系中固定化青霉素酰化酶相转移催化裂解青霉素G为6-APA

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青霉素酰化酶(Penicillin acylase,E.C.3.5.1.11以下简称PA)在工业上用于裂解青霉素为6-氨基青霉烷酸(6-APA)或半合成β-内酰胺抗生素的合成。其应用的形式有水相中固定化酶、膜反应器等,但酶在应用中存在的一个普遍问题就是由于底物或产物抑制,使得最终的产物得率降低,若在两相中进行酶的相转移催化,产物或底物能够及时转移,最终的产物得率必然会明显提高。本论文旨在研究探索适合于固定化的青霉素酰化酶(PA)进行相转移催化反应的两水相体系,通过合理的工艺设计,解除底物和产物抑制,并力图寻求可回收的两水相体系,寻找高效生物催化的反应体系,以实现其用于工业化生产。 为此本论文首先对PEG400-硫酸铵两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应体系进行了探索。从常规方法、Diamond-Hsu模型法等对体系进行了优化,同时对反应体系的底物加量、固定化酶加量等操作参数进行了优化,最后在这个两水相体系中,解决了6-APA小分子在两水相的分配差,底物与产物主要分配在上相,而固定化酶完全分配在下相,底物青霉素从上相扩散到下相经酶催化生成6-APA,产物被萃取到上相,解除6-APA、青霉素及苯乙酸等对酶活性的抑制。整个两水相反应体系中6-APA、青霉素及苯乙酸的分配系数分别为:5.0、3.4和1.8,酶催化反应中6-APA的产物摩尔得率在87-89%,两相总得率超过95%,较目前的商业方法得率提高了近10%,具有一定的推广意义。 其次本论文又对一种光敏感可再生高聚物(P<,NBC> 300000)与葡聚糖20000(Dextran20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应体系进行了探索。在这个两水相体系中,通过优化,在50 mmol/LKC1存在下,6-APA的分配系数可达8.41。催化动力学显示,达平衡的时间近6h,反应最高得率约83%(pH 7.8,底物浓度62 mmol/L,20℃)。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%-98%之间。 最后,在全回收:P<,NBC>-P<,ADB>两水相体系中进行了固定化青素酰化酶的相转移催化青霉素G为6-APA反应的验证实验,6-APA在两相的分配系数可达5.8,转化率最高在85.3%,成相聚合物在反应后通过光照和调节pH实现回收,其回收率达到95-99%,为实现可回收利用的两水相体系奠定了应用基础。
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