海藻糖作为一种性质稳定的保护剂，通过科学家的不懈努力，提出了几种它的保护机制，并研究其在其他方面的应用价值，经过研究发现海藻糖在食品工业、医学等与人类生活息息相关的领域有着广阔的适用价值，很多人想将海藻糖更多的应用于人类的日常生活，给人类的健康带来帮助，但由于其制取上的困难限制了它的广泛应用。本实验已通过基因工程技术将恶臭假单胞菌Pseudomonasputida KT2440内的海藻糖合酶基因进行克隆，并导入大肠杆菌E.coli BL21中，命名为P06，通过酶活验证发现能够高效表达海藻糖合酶。该菌株产海藻糖合酶的粗酶液能够将麦芽糖通过对其分子结构的变构而转化为海藻糖，但是由于大肠杆菌E.coli为致病菌，限制了该菌株所生产的海藻糖在食品，甚至医药上使用。海藻糖安全健康，可用于许多必须保持活性的医疗物质的存储。目前，科学家发现，在对培养好的细胞保存液中添加海藻糖能够保持细胞的长时间存活，这一发现进一步引起了科学家对海藻糖的兴趣。通过研究，发现海藻糖在保护抗体疫苗的实验中起到了很好的作用，近期报道，海藻糖在保存移植器官方面具有显著功效。有文献报道，使用添加了海藻糖的保存液保存的肺，成功的用于对肺气肿患者的肺脏移植手术。总之，随着对海藻糖作用机制的进一步研究，安全健康无毒的海藻糖在食品和医药领域中会起到越来越大的作用。但是基于生产食品级和医药级海藻糖的出发点，本实验使用枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌B. subtilis作为受体菌，并使用pMA5穿梭质粒，成功构建产海藻糖合酶枯草芽孢杆菌工程菌P08。通过传代实验测定了该重组载体pMA5-tres的丢失率，通过10代的传代，发现该载体的质粒丢失率为29.8%，具有较好保持质粒的稳定性。本实验所使用的质粒携带枯草芽孢杆菌B. subtilis组成型强启动子HpaII，无需诱导剂的加入，保证了酶的表达和安全性。通过条件优化确定枯草芽孢杆菌工程菌产海藻糖合酶的酶转化条件，并通过优化将酶活提高至65.47u/g。并通过产海藻糖合酶的两种不同工程菌的对比摇瓶发酵实验，研究它们在酶的表达和酶活方面的优缺点。通过摇瓶发酵实验发现大肠杆菌E.coli P06和枯草芽孢杆菌B. subtilis P08的干重分别为2.14g/L和2.42g/L。通过酶活对比发现，产海藻糖合酶大肠杆菌E.coli P06比产海藻糖合酶枯草芽孢杆菌B. subtilis P08的海藻糖合酶酶活高很多，但是由于枯草芽孢杆菌B. subtilis是安全菌株，使其在生产食品级和医药级海藻糖方面具有大肠杆菌工程菌无可比拟的优势。