咪唑乙烟酸高效降解菌的筛选、鉴定及降解效能研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:liu0686
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随着化学农药尤其是除草剂的大面积广泛的使用,土壤污染、水污染和后茬作物生长受到抑制等问题接踵而来。咪唑乙烟酸就是其中的典型之一。咪唑乙烟酸除草剂虽具有高效广谱的优点,但其残留半衰期较长,不易分解,长期使用会造成后茬作物药害,并对作物的轮作造成很多困扰。因此,如何解决其残留问题成为紧要任务。本文通过筛选对咪唑乙烟酸有高效降解作用的微生物菌株,为进一步探究快速有效的咪唑乙烟酸的生物降解方法奠定了基础。主要研究结果如下:通过对采自黑龙江省某药厂排污渠、哈尔滨周边大豆田、东北林业大学林业示范中心、大兴安岭林区等地的土壤样品进行分离、筛选、纯化,获得104个不同的土壤真菌和细菌,利用高效液相色谱法测定出每个菌株对咪唑乙烟酸的降解效率,筛选出了 2株高效真菌pf3、F1和1株高效细菌C1。根据高效降解菌的来源,可以看出:长期受到农药刺激的土壤中的微生物降解率偏高;从未受过农药污染的森林土壤中的微生物也具有一定的降解能力。通过ITS rDNA和16SrDNA序列分析对比,结合形态学特征,鉴定得出:降解菌pf3 是短密木霉(Trichoderma brevicompactum),降解菌 F1 是哈茨木霉(Trichoderma harzianum),降解菌C1是粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。通过咪唑乙烟酸浓度梯度实验、培养基pH梯度实验、温度梯度实验,得出降解菌pf3短密木霉(T.brevicompactum)发挥降解作用的最适条件是:无机盐培养基的咪唑乙烟酸初始浓度是100mg/kg,pH=8,最适降解温度范围是25℃-35℃。通过降解细菌C1与降解真菌pf3在土壤中对咪唑乙烟酸降解能力的对比实验,可以得出在土壤环境下降解菌pf3降解效果更好,且木霉对植物生长有利,具有广泛的应用前景。通过不同浓度的咪唑乙烟酸的土壤盆栽实验,利用液相色谱法检测实验土壤的咪唑乙烟酸含量,最终得出最适合降解菌发挥降解作用的土壤含咪唑乙烟酸初始浓度是100 mg/kg。高浓度的咪唑乙烟酸会抑制降解菌的降解作用,浓度过低则可能会检测不到或产生较大误差。利用高通量测序方法,对比实验前后的土壤微生物多样性,结果证明大豆生长和降解菌pf3对土壤微生物多样性都有显著影响,降解菌pf3大量增殖,能够有效定植在土壤中。采用凯氏定氮法、扩散法、钼锑抗比色法、火焰光度计法分别测定实验前后土壤的全氮含量、有效氮含量、速效磷含量、速效钾含量,得知大豆生长和降解菌pf3对土壤氮磷钾含量变化也是有影响的。本研究为微生物高效降解咪唑乙烟酸的可行性提供了依据,并且为污染土壤生物修复机制的研究和生物制剂的研制奠定了理论基础。
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